巨噬细胞raw264.7的培养及电转染条件的优化

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1、每北摩业掌报2010，19(9)：21-24ActaAgriculturaeBoreali—occidentalisSinica巨噬细胞RAW264．7的培养及电转染条件的优化宋永利～，陆昕。，邱爽。，祁英培，华松，兰杰，何小宁。，贺小英，张涌。，郑月茂(1．吉林农业科技学院动物医学院，吉林132101；2．西北农林科技大学动物医学院，农业部动物生殖生理与胚胎工程重点开放实验室，陕西杨凌712100；3．西安市雁塔区动物疾病预防中心，西安710061)摘要：为了建立最优的巨噬细胞RAW264．7培养方法和电转染条件，在细胞培养时采用两种方法了解细胞的培养特性并进行电转染

2、条件的优化，建立并验证RAW264．7细胞快速、无血清培养体系的电转染方法。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因，进一步优化巨噬细胞电穿孑L的条件。通过控制电压(250～420V)、脉冲时间、电击次数、温度、电击缓冲液等转染条件，采用不同的条件组合，用电穿孔法将质粒pEGFP—C1转染于培养的RAW264．7细胞。通过荧光显微镜分析转染效率，可见：用胰酶和细胞刮刀消化RAW264．7细胞，细胞损伤小，形态好。利用优化的电转染条件得出最佳转染条件是：电压350V、脉冲时间30ms、电击1次、电击缓冲液成分为cell盐和options且V(cell盐)：V(options)一

3、3：1、最佳温度4℃。关键词：巨噬细胞；体外培养；基因转染中图分类号：Q813文献标识码：A文章编号：1004—1389(2010)09—0021—04CharacterjzatiOnofMacrophageCultureandOptimizationofElectric-mediatedTransfecti0nSONGYongli～，LUXin。，QIUShuang，QIYingpei，HUASong，LANJie，HEXiaoning，HEXiaoying，ZHANGYongandZHENGYuemao。(1．CollegeofVeterinaryMedicine，

4、JilinAgricultureScienceandTechnologyCollege，Jilin132101，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，KeyLaboratoryofAnimalReproductivePhysi0l0gy&EmbryoTechnology，MinistryofAgricultureYanglingShaanxi712100．China：3．CenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，YantaDistrict，Xi’a

5、n710061，China)Abstract：ThispaperintendedestablishingtheoptimalmethodsforcellcultureandelectrictransfectionbasedonmacrophageRAW264．7．Forelectrictransfection，parametersinvolvingvoltage，impulsiontime，electronicshocktimes，temperatureandshockbuffersolutionwereinvestigated．CulturedRAW264．7cell

6、sweretransfectedwithpEGFP—C1byusingGFPasanindicatordependingondifferentcombinationsofparameters．Theresultsshowedthattrypsindigestioncombinedwithscraperwerebetter．withthelessdamagedcel1．Theoptimalconditionsofelectrictransfectionwere350voltinvoltage。30msforimpulsiontime，1timeforelectronics

7、hock，theratioof3：1forshockbuffersolu—tiontocellsalt．aswellas4degreeCelsiusfortemperature．Keywords：Macrophage；Cultureinvitro；Genetransfection巨噬细胞(M)是参与免疫应答的重要细不完整。巨噬细胞作为机体的第一道防线，在胞Ⅲ，在特异性免疫和非特异性免疫中起着重要抵抗病原微生物和其他异物、保护机体的健康方作用。且年龄老化可导致肌肉巨噬细胞功能的面作用重大，一些疾病的发展是由于巨噬细胞中收稿日期：2010—0