3，6二羟黄酮对hl60细胞生长增殖的影响

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1、3，6二羟黄酮对HL60细胞生长增殖的影响：李春梅，刘新光，梁念慈【摘要】目的观察3，6二羟黄酮对HL60细胞的影响。方法分别用台盼蓝拒染观察药物对细胞的毒性作用，流式细胞术、Hoechst33258/PI荧光双染和琼脂糖凝胶电泳观察药物对细胞周期的影响以及凋亡情况。结果3，6二羟黄酮对HL60细胞具有明显地细胞毒作用，呈一定的时效性；流式细胞术、荧光双染和琼脂糖凝胶电泳实验，发现了典型的凋亡细胞，且随药物浓度的增加，凋亡细胞数明显增加；然而统计学分析发现3，6二羟黄酮并没有引起HL60细胞周

2、期的变化。结论3，6二羟黄酮能明显地抑制HL60细胞的增殖，并能引起细胞的凋亡。【关键词】3，6二羟黄酮；HL60细胞株；凋亡　　【Abstract】ObjectiveToobserveeffectof3,6dihydroxyflavoneontheproliferationofHL60celllines.MethodsTheeffectof3,6dihydroxyflavoneontheproliferationofHL60celllinesetry(FCM),theapoptosise,,

3、fluorescencestainingandDNAagrosegelelectroporesis.ConclusionConclusion3,6dihydroxyflavonecouldstronginhibittheproliferationofHL60celllinesandcouldinduceapoptosis.　　【Keyol/L的3，6二羟黄酮能升高SF295、SKOV3、HCT15、HCT15/CL02等多种癌细胞株S期细胞数。本实验首次在体外观察3，6二羟黄酮对人早幼粒白血病细胞

4、株HL60生长增殖的影响，并探讨其抗肿瘤作用与细胞凋亡的关系。　　图13，6二羟黄酮的化学结构（略）　　材料与方法　　1.材料3，6二羟黄酮购于美国Aldich公司；人早幼粒白血病细胞株HL60为广东医学院生化所保存；RPMI1640购于美国Gibco公司；新生小牛血清购于杭州西季青生物公司；PI、EB、RNaseA、Hoechst33258均购于美国Sigma公司；其余为国产分析纯产品。　　2.细胞培养人早幼粒白血病细胞株HL60培养于含有10%灭活的小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/

5、ml链霉素的RPMI1640完全培养基中，37℃、5%CO2饱和湿度孵箱孵育，取对数生长期细胞实验。　　3.药物的配制用DMSO配成原液，分装冻存，临用前用DMSO稀释成所需浓度。药物作用于细胞时，DMSO的终浓度等于0.1%（v/v），实验表明该浓度对细胞生长增殖无影响。　　4.台盼蓝拒染法检测3，6二羟黄酮对HL60细胞生长增殖的影响参考文献［2］收集对数生长期的细胞，PBS洗3次，调整细胞浓度0.5×105～1.0×105/ml，分装于24孔板，每孔1ml，加入1μl不同浓度药物，每组设4个平行孔

6、，并设空白对照孔。细胞加药后置于37℃、5%CO2饱和湿度孵箱培养，加入台盼蓝染色，用台盼蓝拒染法在镜下计活细胞数，按下式计算不同浓度的药物对细胞的生长、增殖抑制率（IR）。抑制率（Inhibitoryrate，IR）=（1用药组活细胞数/空白组活细胞数）×100%；按改良Karber公式计算IC50：　　IC50=ＸmＩ×（P-3PmPn4）　　【其中I=log(最大剂量/相邻剂量)；Xm=log最大剂量；P=阳性反应率之和；Pm=最大阳性反应率；Pn=最小阳性反应率】　　5.流式细胞仪检测细胞周期

7、及凋亡细胞参照文献［3］，略有改动。分别收集不同浓度药物处理的细胞1.0×106，PBS洗3次，用70%（v/v）的冷乙醇4℃固定过夜。上机前收集细胞，用PBS洗涤细胞除去乙醇，用碘化丙啶（PI）染液（含20μg/mlPI，0.25μg/mlRNaseA），室温染色30min。过滤，流式细胞仪（FCM）检测，资料经LysisⅡ收集、贮存、分析。　　6.荧光染色参照文献［4］，略有改动。收集对数生长期的细胞，PBS洗3次，调整细胞浓度2.0～3.0×105/ml，加入6孔板中，加入不同浓度的药物，并设空白对照组

8、，处理一定时间后，收集细胞，加入荧光染料Hoechst33258和PI，至其终浓度分别为10μg/ml和20μg/ml，37℃避光染色30min，紫外光激发，荧光显微镜下观察细胞核的形态及颜色改变以区分出正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并拍照。　　7.琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段化参照文献［5］，略有改动。收集107细胞，PBS洗涤离心沉淀细胞，用50μl裂解液（1%NP-40、20mmol/LEDT