低浓度h2o2对hl┐60细胞增殖的影响

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1、低浓度H2O2对HL┐60细胞增殖的影响　　摘要:目的探讨低浓度H2O2对同步化处理或未经处理的HL-60细胞作用的时间效应关系.方法将培养的HL-60细胞进行同步化处理或取对数生长期细胞，施加不同浓度梯度的H2O2影响，作细胞计数，四唑盐（MTT）比色试验检测细胞生存率，流式细胞技术测定细胞周期分布.结果低浓度H2O2作用组HL-60活细胞数明显高于未施加影响组，尤以H2O2终浓度为2μmolL-1组作用明显（P<0.01），细胞周期也有轻度改变.结论低浓度H2O2作用HL-60细胞可使细胞数增

2、加，其影响有时间效应关系，机制可能同其影响细胞周期有关.　　Keyia，promyelocylic，a-cute;cellcycle　　Abstract:AIMToinvestigatetheeffectsofhydrogenper-oxideonhumanleukemiccells（HL-60）invitro，andillus-trateitspossiblemechanism.METHODSCultivatedHL-60cellsofsynchronizationornon-synchronizat

3、ionberoflivingcellseasuredbyMTTmethods.Cellcycledistributionetry.RESULTS-paredberofHL-60cellsaf-fectedbyloolL-1arkable.Thecellcyclechangedslightly.CONCLU┐SIONLoberofHL-60livingcells.Itsmainmechanismmightprobablybeinvolvedinthechangeofthecellcycle.　　0引言　　

4、关于自由基、活性氧对机体损害的机制一直是研究热点.自从1981年美国学者LarryTT）购自华美生物有限公司.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　HL-60细胞常规培养，培养液为含100mLL-1小牛血清，青、链霉素各1×105uL-1的RPMI-1640，隔天换液.　　1.2.2细胞计数测细胞存活率　　取对数生长期细胞，置4℃冰箱4h，使细胞低温同步化后取出，立即施加不同浓度梯度的H2O2溶液，浓度范围0.1μmolL-1至10mmolL-1，设阴性对照，37℃温育.取处理后不同时间点终止培养，4

5、gL-1台盼蓝溶液染色，计数活细胞和细胞总数.　　1.2.3四唑盐（MTT）比色法检测细胞活力　　取对数生长期细胞，调整细胞密度为5×105mL-1，以每孔0.2mL接种96孔板，共五板，37℃，50mLL-1CO2孵育.次日晨每板分12个组，每组8个平行孔，按不同终浓度分别加入H2O2溶液，浓度梯度如下:0.01，0.1，1，2，5，10，20，50，100，1000μmolL-1，无H2O2组，单纯培养基组.五块板分别于0，1，2，3，4d取出，加5gL-1MTT溶液20μL/孔，37℃温育4h后吸

6、取上清，加二甲基亚砜（EMSO分析纯）150μL，震荡10min，使紫色结晶物充分溶解，用酶联免疫计数仪，波长为490nm，测定各孔吸光度.　　1.2.4细胞周期DNA分布测定　　取对数生长期细胞，无血清培养液培养24h使细胞同步化，离心去除无血清培养基，加入含100mLL-1小牛血清的1640培养基，稀释细胞密度为5×105mL-1，分别加入12孔板，每孔容积为2mL.取6孔各施加终浓度为2μmolL-1的H2O2溶液，另6孔各加入等体积三蒸水.37℃，50mLL-1CO2孵育，于不同时间点（0，2，

7、6，12，18，24h）同时取施加影响组和阴性对照组各一孔细胞，置两只离心管中以800rmin-1离心5min，PBS洗两次，弃上清，700mLL-1乙醇固定，4℃存放待测.测定时离心去上清，PBS洗涤2次，加入碘化丙啶，避光染色15min，FACSPLUS流式细胞仪进行细胞周期测定.统计方法:结果以本校卫生统计学教研室统计软件SPLM作重复测量方差分析［5］.　　2结果　　2.1细胞计数　　低浓度剂量H2O2（1μmolL-1）作用HL-60细胞后，光镜下观察见细胞外形规则，边缘光滑，折光性好，死亡细

8、胞很少，增殖活跃，活细胞数明显较空白对照组多;中等浓度剂量H2O2（100μmolL-1）作用HL-60细胞后，3h可见少许变形细胞，外形不规则，有长条形状，细胞轮廓尚在，可见一些细胞碎片，12h活细胞数降至最低点，后开始逐渐恢复;高浓度剂量H2O2（5mmolL-1）作用HL-60细胞后，细胞大量死亡，胞膜不完整，仅见细胞轮廓，出现大量细胞碎片，台盼蓝溶液染色见细胞均为蓝染，12h后细胞全部死亡.72h后三组活细胞数均开始下降（Fig1）