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1、XX大学毕业论文3,6二疑黄酮对HL60细胞生长增殖的影响2014年6月25日3,6二疑黄酮对HL60细胞生长增殖的影响作者：李春梅，刘新光，梁念慈【摘要】冃的观察3,6二疑黄酮对HL60细胞的影响。方法分别用台盼蓝拒染观察药物对细胞的毒性作用，流式细胞术、Hoechst33258/PI荧光双染和琼脂糖凝胶电泳观察药物对细胞周期的影响以及凋亡情况。结果3,6二轻黄酮对HL60细胞具有明显地细胞毒作用，呈一定的吋效性；流式细胞术、荧光双染和琼脂糖凝胶电泳实验，发现了典型的凋亡细胞，且随药物浓度的增加，凋亡细胞数明显増加；然而统计学分析
2、发现3,6二疑黃酮并没有引起HL60细胞周期的变化。结论3,6二軽黄酮能明显地抑制HL60细胞的增殖，并能引起细胞的凋亡。【关键词】3,6二超黄酮；HL60细胞株；凋亡[Abstract]ObjectiveToobserveeffectof3,6dihydroxyflavoneontheproliferationofHL60celllines.MethodsTheeffectof3,6dihydroxyflavoncontheproliferationofHL60celllineswasdetectedbyTrypanbluedye
3、exclusionassay,thechangesofthecellcyclewasanalyzedbyflowcytometry(FCM),theapoptosiswasanalyzedbyFCM,Hoechst33258/PIfluorescencestainingandDNAagarosegelelectroporesis.Results3,6dihydroxyflavonehadstrongcytotoxicitytoHL60celllineswithdependenceoftime,Whileabnormalityofce
4、llcyclescouldnotbeinduced・Aftertreatedwith3,6dihydroxyflavoncfor36h,HL60celllinecouldbeinducedapoptosis,whichwasconfirmedbyFCM,fluorescencestainingandDNAagrosegelelectroporesis.ConclusionConclusion3,6dihydroxyflavonecouldstronginhibittheproliferationofHL60celllinesandc
5、ouldinduceapoptosis.口血病是一种血液恶性肿瘤，口血病细胞丧失分化、成熟的能力以及异常增殖，致使恶性细胞在体内积累。白血病对人体有极人的危害，发病率较高，为2.76/10万，白血病的治疗在半今世界上仍是•一大难题。有关3,6二轻黃酮（化学结构见图1）与肿瘤细胞关系的报道很少，仅有学者研究了它对几种不同的细胞周期的影响［1］,发现30pmol/L的3,6二梵黃酮能升高SF295、SKOV3、HCT15、HCT15/CL02等多种癌细胞株S期细胞数。本实验首次在体外观察3,6二疑黄酮对人早幼粒白血病细胞株HL60生长增
6、殖的影响，并探讨其抗肿瘤作用与细胞凋亡的关系。图13,6二轻黄酮的化学结构（略）材料与方法1•材料3,6二超黄酮购于美国Aldich公司；人早幼粒白血病细胞株HL60为广东医学院生化所保存；RPMT1640购于美国Gibco公司；新生小牛血清购于杭州西季青生物公司；PLEB、RNaseA>Hoechst33258均购于美国Sigma公司；其余为国产分析纯产甜。2.细胞培养人早幼粒白血病细胞株HL60培养于含有10%灭活的小牛血清、100U/m1青霉素和100pg/m1链霉素的RPMI1640完全培养基屮，37°C、5%CO2饱和湿度
7、孵箱孵育，取对数生长期细胞实验。3.药物的配制用DMSO配成原液，分装冻存，临用前用DMSO稀释成所需浓度。药物作用于细胞吋，DMSO的终浓度等于0.1%（v/v）,实验表明该浓度对细胞生长增殖尢影响。4.台盼蓝拒染法检测3,6二轻萸酮对HL60细胞生长增殖的影响参考文献［2］收集对数生长期的细胞，PBS洗3次，调整细胞浓度0.5x105〜1.0xl05/ml,分装于24孔板，每孔1ml,加入1卩1不同浓度药物，每组设4个平行孔，并设空白对照孔。细胞加药后置于37°C、5%CO2饱和湿度孵箱培养，加入台盼蓝染色，用台盼蓝拒染法在镜下
8、计活细胞数，按下式计算不同浓度的药物对细胞的生长、增殖抑制率(IR)o抑制率(Inhibitoryrate,IR)=(1用药组活细胞数/空白组活细胞数)xlOO%；按改良Karber公式计算IC50：IC50=XmIx(p-3PmPn
