目的基因的获得.ppt

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1、基因工程技术（三）获得目的基因的方法前言基因工程技术又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过载体或其它手段送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。所以目的DNA片段的获得是进行DNA重组的前提。方法一：直接从细胞中提取、酶切特点：（1）、如果从基因组DNA获取目的基因相对于目的基因的长度，基因组的DNA长度太大。（2）、从染色体以外的遗传物质中获得目的基因是常用的做法方法二、化学合成法人工合成寡聚核苷酸技术：<60bp1.2元/bp在60bp与120bp之间6.

2、8元/bp提供DNA合成服务的公司：上海生工生物工程有限公司上海英俊生物科技有限公司上海华诺生物科技有限公司北京奥科生物技术有限责任公司等特点：1、合成的产物是单链DNA2、5’、3’末端均为羟基3、应用场合：真核生物基因在原核中表达；难以得到模板的情况；获得双链的方法：（1）、3’末端部分反向互补，混合后在DNA聚合酶作用下互为模板形成双链（2）分段合成法OH，先用激酶处理，使磷酸化连接酶OH，先用激酶处理，使磷酸化（3）、分段合成，结合PCR技术PCR方法三、PCR技术（1）、直接从原核微生物细

3、胞或质粒中扩增目的片段（2）、引入突变a、引物5’端引入b、定点突变，SOE技术c、易错PCR方法四、RT-PCR技术针对真核生物基因不连续的特点，利用mRNA为核苷酸信息资源，用逆转录---PCR法获得目的基因AAA…AAA3’5’TTT…TTTComplimentaryDNART：ReverseTranscriptaseSummary:1、细胞中提取；2、化学合成；3、PCR技术；4、RT-PCR前言基因工程技术又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过载体或其它手段送入受体细胞

4、，使它们在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。所以目的DNA片段的获得是进行DNA重组的前提。（一）DNA片段的获得1、从基因所在的生物体直接取得限制性内切酶（restrictionenzymes）2、人工合成DNA片段（DNA合成仪）3、PCR反应合成DNA4、mRNA反转录成cDNA5、用机械的方法超声波、粘性末端、平整末端200多种限制性内切酶，切点各不相同（二）DNA片段和载体的连接——重组体DNA载体：细菌中的质粒、温和噬菌体重组体DNA：载体DNA+引入的DNA粘性末端平整末端连接酶

5、目的基因的表达目的基因在插入载体后，在其编码顺序的5’端有能被受体细胞识别的启动基因顺序及能和核糖体结合的顺序。则该目的基因就可以表达，从而使是因工程得以实现。1.基因工程用于生产蛋白质类药物治疗糖尿病的胰岛素，是一种51个氨基酸残基组成的蛋白质1982年美国EliLilly公司推出基因工程制造的人胰岛素，商品名为(Humulin)。干扰素用于治疗肝炎等病毒感染性疾病，有良好疗效。1升发酵液中所得的干扰素相当于过去从1000升人血中所得。生产成本也大为降低。目前用基因工程生产的蛋白质药物已达数十种，

6、许多以前本不可能大量生产的生长因子，凝血因子等蛋白质药物，现在用基因工程办法便可能大量生产。