教学讲稿细胞培养课件

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1、细胞培养YueChenPh.D.TechnicalServiceRepresentativeInvitrogenCorporationGIBCOGIBCO-质量和信誉的保证40多年来，研究者依赖Invitrogen公司GIBCO血清在体外再造适于细胞生长、繁殖和分化的生理环境。在提供细胞培养基、平衡盐溶液和培养用试剂的同时，GIBCO提供高品质的血清。GIBCO自1961年开始生产用于细胞培养的动物血清，是此行业的开创者。在四十多年的岁月里，一直保持在技术和品质方面的领先水平，血清和培养基的市场占有率常年蝉联全球第一。GIBCO品牌包括：1．血清2．培养基3．细胞培养试

2、剂4．无血清培养基5．定制产品2细胞培养相关设备CO2培养箱，水浴，离心机，液氮罐，显微镜3细胞培养主要试剂基本培养基（DMEM、RPMI1640等）血清（胎牛血清，小牛血清等）细胞培养试剂（抗生素、细胞解离试剂，PBS等）辅助试剂（细胞冻存液、生长因子）真核细胞（细胞系、原代细胞、干细胞、昆虫细胞）4血清－血清的作用•附着因子—纤连蛋白，提高粘性•增殖、分化所需的激素和生长因子•调节膜的渗透性•生长因子、脂类、酶和微量元素的载体•缓冲液•毒素灭活作用•保护作用:pH波动,蛋白酶,有毒试剂,机械损伤5GIBCO动物血清的种类胎牛血清(FBS):原产地（美国；澳大利亚；巴

3、西；新西兰等）经过鉴定的(certified)vs质量有保证的(qualified)新生牛血清(NBS):出生少于十四天小牛血清:出生少于一年捐献血清:特殊饲养的，专门用来进行血清提取的牛其他血清:horse,chicken,goat,lamb（羊）,porcine（猪）,rabbit6血清－血清的类型•热灭活:(在56℃水浴30min)–热灭活一些可以产生免疫应答反应的物质（补体等）–在昆虫细胞培养和胚胎干细胞培养中需要•透析:–透析掉小分子量的物质–离子，氨基酸–用于标记•低IgG:我们有自己独特的层析技术去除γ球蛋白–经过处理将IgG去除–用于免疫学研究及其生产生

4、物制品•胚胎干细胞专用:–胚胎/间充质干细胞专用–维持干细胞处于为分化状态•γ-射线照射处理的血清(客户订制)7血清－可追踪性：血清品质的证据GIBCO收集并保留从采血、处理、检测到发运的全部文件供追踪之用血清通常具有3-5年的保质期血清的性能可能会随着每批，和季节的不同而不同在拿到每一批血清前应该进行验证通常,购买一次血清最好足够1-2年使用，确保每一瓶都一样，而不需要每次都进行验证8培养效能检测对所有的胎牛血清，GIBCO都进行以下培养效能检测。选择胎牛血清的最重要的标准是其支持特殊的细胞生长的能力，因此，除了保证血清通过严格的品质控制，GIBCO也同时在实验室条件

5、下对血清的三个重要的培养效能进行检测：集落效率检定：分析每一批胎牛血清促成单一细胞集落的能力，及促进老鼠骨髓瘤细胞及其衍生的融合瘤细胞的生长能力。实际应用在低密度非贴附性细胞的集落形成、融合瘤发育以及单克隆抗体的制造。贴附效率检定：利用一贴附的、已转型的人类细胞株来检测每一批血清促使低密度细胞贴附及分裂的能力。实际应用在低密度或正常密度、转型细胞株及细胞株的繁殖。二倍体成纤维细胞生长促进检定：评估每一批血清能维持难培养的贴附细胞长期生长的能力。培养数代WI-38人类二倍体成纤维细胞，计算每一代培养的细胞总数。此项检测所挑选出的胎牛血清批号能维持难以生长的细胞、贴附性细胞

6、、正常的细胞株的生长及存活。此外，对部分胎牛血清，我们也进行昆虫细胞生长促进检定：评估每一批Certified等级胎牛血清，及特定批号的Qualified等级的胎牛血清其促进SF9昆虫细胞生长的能力。此项测试为选择适合昆虫细胞生长及BEVS实验的胎牛血清最佳指标。9其它检测对Certified胎牛血清，除以上检测外，还进行如下检测：噬菌体检测；我们利用适当的大肠杆菌，例如K12，进行噬菌体溶菌斑记数分析。此检测可以了解胎牛血清收集与制造过程的产品质量，噬菌体浓度高表示胎牛血清的原料处理有问题。生物化学检测（碱性磷酸酶等21项内容）；激素检测（雌二醇等5项内容）；血红蛋白

7、检测其它对EScell-QualifiedFBS,要进行特殊检测以确定对胚胎干细胞未分化的细胞形态的维持能力。对小牛血清和新生牛血清，我们进行其对VERO细胞生长的支持能力的检测；对马血清，我们进行其对Sp2/O-Ag14细胞生长的支持能力的检测；对部分血清，我们也进行细胞毒性的检测。101.保存血清最好的方法?我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2.如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～