《细胞培养技术》课件

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1、细胞培养技术药物科学与技术学院——周立军参考书目《细胞培养》，世界图书出版公司，1996年《培养细胞学与细胞培养技术》，上海科学技术出版社，2004年本次课内容细胞培养的基本知识一、绪论培养法的种类、培养法的发展、细胞培养的常用术语、培养细胞的作用及意义、培养法的应用二、培养细胞的特征培养细胞的生长方式和类型、培养细胞的生长特点和生长增殖过程、细胞培养的条件及影响因素一、绪论细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。涉及有细胞生物学、生物化学与分

2、子生物学、动物学与植物学、病原学、肿瘤学、遗传学、生物工程学甚至光学、物理学等等学科。因其涉及面很广所以已经渗透到生命科学的各个领域。细胞培养（cellculture)组织培养的概念组织培养（tissueculture）：其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。器官培养（Organculture）：指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法，以上三个层次的培养，又可统称之为体外培养（invitro）。培养法的种类

3、体外培养细胞培养组织培养器官培养贴壁培养悬浮培养体外培养种类细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。群体培养（massculture）：即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。克隆培养（cloneculture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。群体培养（左）和克隆培养（右）原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列﹙×100﹚原代培养第7天，多个集落形成并融合﹙×100﹚培养法的发展组织培养法的发展经历近百年。德国人Roux（1885

4、）用温生理盐水体外培养鸡胚组织并存活数月被认为是组织培养的萌芽试验。1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生活一个月，提示组织或细胞离体后，在人工培养条件下，仍能生存。发展简史培养法的发展关于神经轴突的结构和形成有争议。哈里森（生理学家）首先解剖了蛙胚的原始脊髓节段在淋巴液中进行培养。在显微镜下观察到从神经芽细胞延伸出神经轴突的状况。建立起一套合理的无菌培养技术——哈里森悬滴培养法发展简史哈里森悬滴培养法培养物凝固的淋巴凹玻片槽盖玻片将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，使组织小块固定在一定的位置上。然后将

5、盖玻片倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周缘用蜡封固。蛙胚神经组织存活了数周——体外培养组织和细胞的基本模式系统。发展简史卡氏瓶的发明Carrel用反复传代的方法使细胞系存活34年。他采用的无菌技术，以及后来设计的培养瓶（卡氏瓶，Carrelflask）等都是对组织培养的重要贡献。特别是他的连续培养，为后来的传代培养奠定了基础。发展简史组织培养发展示意图1923年，Carrel设计了卡式瓶培养法，扩大了组织的生存空间。1924年Maximow的双盖片培养法，使之更易于传代和减少污染。发展简史1957年Dulbecco等采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，

6、获得了的单层细胞培养，单层培养成了组织培养普遍应用的技术。促进了细胞系(cellline)的建立。近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，各国建立细胞库发展简史我国组织培养的发展20世纪30年代传入我国。20世纪50年代起步。20世纪70年代，成为医学和生物学研究中应用的手段。组织培养常用术语原代培养（primaryculture）：从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。传代培养（passageculture）：将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代培养。注：传代（passage，subculture）原代培养胎儿细胞培养比成人容易；成体组织中成

7、纤维细胞、肾上皮细胞比较容易，上皮细胞培养难。细胞间的分离酶：胰蛋白酶、胶原酶、单一种类细胞的分离培养：根据培养条件——培养基、细胞接着面的条件、接着速度、离心法等。术语细胞系（cellline）：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。细胞株（cellstrain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物。克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。术语有分化特性的细胞系和细胞株组织来源细胞系增殖性物种分化特性脾Friend永