第18章--高效液相色谱法.ppt

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1、第十八章高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography；HPLC基本要求掌握：反相键合相色谱法的分离机制、保留行为的主要影响因素和分离条件选择；化学键合相的性质、特点和种类及使用注意事项；流动相对色谱分离的影响；HPLC中的速率理论及其对选择实验条件的指导作用；定量分析方法。熟悉:反相离子对色谱法和正相键合相色谱法及其分离条件的选择；高效液相色谱仪的部件；紫外检测器和荧光检测器的检测原理和适用范围。了解：离子、手性和亲合三种色谱法；溶剂强度和选择性；混合溶剂强度参数的计算和流动相最优化方法。基本内容§18.1高效液相色谱法的主要类型和

2、原理§18.2高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择§18.3高效液相色谱仪§18.4高效液相色谱分析方法流动相为液体，采用高效固定相，以高压输送流动相的色谱法。引入气相色谱的塔板理论和速率理论及先进的实验技术和方法，通过改进固定相达到了高效，采用高压输送流动相，达到了高速。特点：分离效能高、分析速度快及仪器化next高效液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法对比经典液相色谱法高效液相色谱法（分析型）固定相一般规格特殊规格固定相粒度（μm）75~5003~20固定相粒度分布(RSD)20~30%<5%柱长（cm）10~10010~30柱内径（cm）2~50.1~0.5柱

3、入口压强（kg/cm2）0.01~120~300柱效(每米理论塔片数)10~100104~105样品用量（g）1~1010-7~10-2分析所需时间（h）1~200.05~0.5装置非仪器化仪器化高效液相色谱法与气相色谱法对比气相色谱（GC）高效液相色谱（HPLC）应用范围占有机物的20%占有机物的80%分离效果高更高选择性流动相是气体，只能选择固定相流动相是液体，流动相、固定相都可选择。选择性广。温度高温常温（分离效果好）灵敏度(g/ml)10-1210-9第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、基本类型吸附色谱法（adsorptionchromatographyLSC

4、）分配色谱法（partitionchromatographyLLC）离子交换色谱(ionexchangechromatographyIEC)空间排阻色谱(stericexclusionchromatographySEC)主要类型化学键合相色谱法﹡（bondedphasechromatographyBPC）离子对色谱法(pairedionchromatographyPIC)离子抑制色谱法(ionsuppressionchromatographyISC)亲合色谱法(affinitychromatographyAC)手性色谱法(chiralchromatographyCC)疏溶

5、剂理论疏溶剂缔合作用示意图l.键合烃基2.溶剂膜3.溶质的极性部分4.溶质的非极性部分缔和解缔和（1）反相离子抑制色谱离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质pH一定的缓冲溶液酸性物质——加入酸，如HAc，tR↑，K↑碱性物质——加入碱，如NH3·H2O，tR↑，K↑调节pH范围：2.0~8.0适用：pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物3.反相离子抑制色谱和反相离子对色谱(2)反相离子对色谱法适用：pH:离子对试剂种类及浓度：(2)反相离子对色谱法离子对试剂种类及浓度：适用：pH:第二节　高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择一、化学键合相色谱的固定相（１）液－固吸附色谱法

6、（ＬＳＣ）固定相常用硅胶、高分子多孔微球第二节　高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择一、化学键合相色谱的固定相优点：固定液不易流失，稳定（在pH2~8范围)，热稳定性好，且能用于梯度洗脱。硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯键合量评价：含碳量　覆盖度　封尾二、化学键合相色谱法的流动相要求：①与固定液不反应②对样品有良好溶解度k=1~10最佳k=2~5③与检测器匹配④粘度小、纯度高。⑤流动相使用前需用微孔滤膜滤过、脱气。(一）流动相对分离的影响由填固充定质相量及决色定谱受溶剂种类(选择性

7、)影响受溶剂配比(强度)影响(二)溶剂的强度和选择性1．溶剂的极性和强度斯奈德(Snyder)溶剂极性参数(polarityparameter)正相色谱溶剂极性越强，洗脱能力越强，是强溶剂。反相色谱溶剂极性越弱，洗脱能力越强，是强溶剂。强度因子S正相色谱极性参数P′反相色谱反相色谱常用溶剂的强度因子水甲醇乙腈丙酮二恶烷乙醇异丙醇四氢呋喃03.03.23.43.53.64.24.5强度因子S正相键合相色谱法式中　　和　　为纯溶剂i的极性参数及该溶剂在混合溶剂中的体积分数。2.混合溶剂的强度反相键合相色谱法原则：控制k=2~5Xe