第17章 高效液相色谱法ppt课件.ppt

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1、第17章高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)概述经典LCHPLC柱之内径1~5cm~0.4cm长度50~100cm15~50cm填充材料粒度150µm~200µm4µm~10µm使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5h~天~10min经典LC与HPLC比较HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器与气相色谱法比较，HPLC的优点分析对象广气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定

2、性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。流动相对分离起作用气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。经常在室温条件下操作气相色谱法一般在较高温度下进行缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。高效液相色谱法的分类根据分离机理液-液分配色谱化学键合相色谱液-固吸附色谱离子交换色谱离子色谱离子对色谱尺寸排阻色谱亲和色谱高效液相色谱仪1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱；6.检测器；7.废液瓶；8

3、.数据处理和控制系统Agilent1100系列高效液相色谱系统高压输液系统储液罐高压输液泵要求：密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调流量范围宽，耐腐蚀分类：恒流泵（机械泵）恒压泵过滤器压力脉动阻力器机械注射泵机械往复泵多用于流量要求在1-50L/min范围的微型HPLC或毛细管柱HPLC中活塞泵隔膜泵进样系统隔膜注射进样器高压进样阀多采用六通阀进样分离系统色谱柱柱管固定相检测系统溶质性检测器对被分离组分的物理或化学特性有响应紫外检测器荧光检测器电化学（安培）检测器总体检测器对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应示差折光检测器电导检测器紫外检测器固定波长型254nm或280nm可

4、调波长型紫外可见分光光度计光电二极管阵列的紫外检测器，采用计算机快速扫描采集数据，可获得三维色谱图TungstenlampCouplinglensDeuteriumlampSourcelens(Achromat)HolmiumoxidefilterSupportlensFlowcellSpectrolensGratingArrayProgrammableSlitOpticalPath-HP1100HP1100DiodeArrayWavelengthRange:190-950nmLamps:Shine-throughdeuteriumlamp(uv-range)Tungstenla

5、mp(vis-range)Slits:Programmableelectromechanical;1,2,4,8and16nmNoise:2x10-5AUat254nmand750nmFlowCells:STD10mm13ul,Semi-micro6mm5ul,Micro/HP10mm1.7ul荧光检测器优点：是一种选择性强、灵敏度高，比紫外检测器高23个数量级，可达pg量级或更低，可用于梯度淋洗。缺点：样品适用范围有限，定量分析的线性范围较窄(104-105)。示差折光检测器偏转式和反射式是一种通用型检测器，灵敏度可达10-7gcm-3。缺点是对温度变化敏感，不能用于梯度淋洗

6、。偏转式示差折光检测器光路图电导检测器是离子色谱法应用最多的检测器，依据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质的含量。受温度的影响较大，需放在恒温箱中。pH>7时不够灵敏。附属系统脱气梯度淋洗预饱和柱和预柱恒温自动进样馏分收集数据处理梯度淋洗在分离过程中使用两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，使流动相的强度、极性、pH或离子强度发生变化，从而改变被测组分的相对保留值，提高分离效率。作用类似于气相色谱中的程序升温。预柱和预饱和柱预柱：安装在进样器和分析柱之间，填充有与分析柱相同的固定相作用：防止来自样品的不溶性颗粒物进入分析柱而造成污染；将强保留

7、组分截流在预柱上，避免进入分析柱而造成污染。预饱和柱：安装在泵和进样器之间，其中填充有硅胶填料即可。作用：防止固定相在流动相中的溶解高效液相色谱的固定相以承受高压能力分类刚性固体硬胶按孔隙深度分类表面多孔型固定相全多孔型固定相高效液相色谱的流动相基本要求对待测样品，有合适的极性和良好的选择性高纯度化学稳定性好低粘度与检测器相匹配液固吸附色谱(LSAC)氧化铝和氧化镁极性固定相硅酸镁分子筛等无定形硅胶硅胶（酸性）应用最广薄壳型硅胶全多孔球形硅胶非极性固定相多孔微粒活性炭