生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化.pdf

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1、曾焱华等生殖支原体粘附素蛋白Me,Pa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化第11期doi：10．3969／j．issn．1000—484X．2010．11．011生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化①曾焱华吴移谋游晓星詹利生粟盛梅邓红玉(南华大学病原生物学研究所，衡阳421001)中国图书分类号R392-33文献标识码A文章编号1000．484X(2010)11．1011．05[摘要]目的：制备并纯化生殖支原体(Mg)粘附素蛋白(MgPa)的多克隆抗体，为进一步探讨MgPa的生物学功能及其在Mg的临床诊断与预防方面的应用提供实验基础。方法：构建原核表达

2、载体，在大肠杆菌中诱导表达生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa)，重组蛋白经Westernblot鉴定后用Ni—NAT亲和层析柱纯化，然后免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa血清。用饱和硫酸铵法和溴化氰活化的琼脂糖4B亲和层析柱纯化多克隆抗体，并经Westernblot鉴定免疫血清的特异性，用间接ELISA法检测免疫血清的效价。结果：在大肠杆菌中成功表达一分子量约为37kD的6×His—rMgPa融合蛋白，免疫新西兰兔后获得了相应的多克隆抗体，利用饱和硫酸铵法和亲和层析法纯化后得到具有较高纯度的多克隆抗体，SDS-PAGE分析的结果表明所制备的多克隆抗体分子量约为150kD，We

3、sternblot结果表明制备的抗体具有较高的特异性，ELISA结果显示抗体的效价为1：25600。结论：成功制备了高效价、高特异性的兔抗~MgPa的多克隆抗体，为进一步研究ngPa的生物学功能、Mg的临床诊断与预防提供了重要的实验基础。[关键词】生殖支原体；粘附蛋白；多克隆抗体；亲和层析ExpressionoftheadhesionproteinofMycop／asmagenitaliumandpreparationandpurificationofitSpolyclonalantibodiesZENGYah—Hua，WUYi-Mou，YOU∞一，ZHANLi·Shen

4、g，SUSheng-Mei，DENG，!g—Yu．InstituteofPathogenicBiology，UniversityofSouthChina，ttengyang421001，ChinalAbstractJObjective：Toprepareandpurifyrabbitanti—Mycoplasmagenitaliumadhesionprotein(MgPa)polyclonalantibodyforpro—ridingatoolforthestudyofthebiologicalfunctionofngPaandtheehnicaldiagnosisand

5、preventionofM．genitalium．Methods：Therecombi—nantprokaryoticexpressionplasmidwastransformedintoE．coliRosetta]N2(DE3)toexpresstheadhesionproteinofM．genitalium．There—combinantprotein(rngPa)wasidentifiedbyWesternblot，andthenpurifiedbyNi—NATimmunoafinitychromatography．NewZealandwhitesrabbitswe

6、reimmunizedwiththepurifiedproteintogeneratepolyclonalantibody．Theilnmuneserawereinitiallypurifiedbysaturatedmnrnoniumsulfate，andthenbyafinitychromatographywithCNBr-activatedSepharose4BcoupledwithrMgPa．PurifiedpolyelonalantibodyWascharacter—izedbyELISAandWesternblotanalysis．Results：Theadhe

7、sionproteinofM．genitaliumWassuccessfullyexpressedinE．coliRosettaTM2(DE3)．SDS-PAGEanalysisprovedthattheantibodyhadhighpurityandit‘smolecularweightwasabout150kD．Theresultsshowedthatthepolyelonalantibodyhadhighspecifcityandit’Stiterwas1：25600．Conclusion：Thepolyelonalan