某地区丙型病毒性肝炎患者HCV基因分型研究.pdf

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1、国际检验医学杂志2012年3月第33卷第6期lntJLabMed，March2012，Vo1．33,No．6·683··临床检验研究论著·某地区丙型病毒性肝炎患者HCV基因分型研究徐辉，居军，杨伟国(甘肃省临床检验中心，甘肃兰州730000)摘要：目的了解该地区丙型病毒性肝炎(以下简称丙型肝炎)患者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型情况。方法分别以ELISA和重组免疫印迹试进行血清标本抗HCV抗体筛查和确认，对抗HCV抗体阳性标本用实时荧光定量PCR进行病毒载量检测。对病毒载量大于103copy／mL的标本用多重PCR进行HcV基因分

2、型。结果125例抗HcV抗体阳性标本中，HCV基因型主要为1b、2a、3a、1c、2c的检出率分别为58．4、21．6、3．2、4．0和8．0。结论该地区HCV感染主要以1b型为主，其次是2a和3a型，检出其他地区少见的1C和2c型，说明该地区丙型肝炎流行的基因型呈多样性。关键词：肝炎抗体，丙型；聚合酶链反应；基因分型D0I：10．3969／j．issn．1673—4130．2012．06．019文献标识码：A文章编号：1673—4130(2012)06—0683—02HCVgenotypeanalysisinpatientswi

3、thviralhepatitistypeCincertainareaXuHui，JJun，Yangiguo(CenterofClinicalExperimentinGansuProvince，LanzhouOansu730000，China)Abstract：ObjectiveToinvestigatehepatitisCvirus(HCV)genotypesinpatientswithviralhepatitistypeCincertainarea．MethodsELISAandimmunohlottingassaywerepe

4、rformedforthescreeningandconfirmationofanti—HCVinserumsamples．andthevirusloadinconfirmedsamplesweredetectedbyrealtimequantitativePCR．Sampleswithvirusloadmorethan103copy／mLwereanalyzedforHCVgenotypesbyusingmultiplexPCR．ResultsAmong125casesofsamples，positivewithanti—HCV

5、，thede—tectionratesofHCVgenotype1b，2a，3a，lCand2cwere58．4，21．6，3．2％，4．0and8．0H．ConclusionThemostcommonHCVgenotypeinpatientswithHCVinfectionwaslb，followedby2aand3a，andgenotypelcand2c，rarelydetectedinotherdis—tricts，werealsocouldbedetected，indicatingthatthegenotypesofhep

6、atitisCinthisareamightbediverse．Keywords：hepatitisCantibodies；polymerasechainreaction；genotyping丙型肝炎病毒(HCV)是经血液和(或)体液传播的一种单续表1不同基因型扩增引物股正链RNA病毒，由于RNA复制酶的低保真性及缺乏校正功能，HCV呈高度异质性。HCV基因分型在HCV感染、传播、诊疗及预防等方面均有重要意义，且中国不同地区HCV基因型存在差异。HCV基因型与干扰素抗病毒治疗的应答密切相关，是决定丙型病毒性肝炎(以下简称丙型肝炎)

7、患者干扰素治疗效果的重要因素。1资料与方法1．1一般资料由甘肃省临床检验中心及各地、州、市级医院收集的HCV感染患者血清标本，一7O℃以下保存备用。1．2仪器与试剂MX一3000P型荧光定量PCR扩增仪(美国安捷伦)。抗HCV抗体ELISA检测试剂盒(厦门新创)，重组免疫印迹试剂(美国MPBiomedicals)，核酸纯化柱、实时荧光定量PCR试剂(深圳凯杰)，PCR试剂、逆转录试剂(深圳达安)。基因分型引物由深圳达安公司合成。不同基因型扩增引物见表1。表1不同基因型扩增引物1．3方法1．3．1标本确认以ELISA试剂对所收集标本

8、进行抗HCV抗体筛查，用重组免疫印迹试验进行确认。对抗HCV抗体确认阳性标本用荧光定量PCR进行病毒载量检测。具体步骤严格按试剂盒说明书操作。1．3．2HCV基因分型采用二氧化硅吸附分离技术纯化HCVRNA，具体步骤严格按核酸纯化柱试剂盒说明书操作