丙型病毒性肝炎母婴传播机制的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文英文缩写词表⋯●⋯●●⋯●⋯●⋯●●●⋯⋯■●⋯⋯●●●●●⋯●●⋯⋯●●●⋯●⋯●⋯●●⋯●⋯●⋯●⋯●●●英文缩写词表英文缩写英文全名町VmVHIV}{(、vRNAD}帆m喂n砌ⅥPTFAADERT—PcRPBSFITCIgGFcRna)EhepatitisCvirushepatitisBvirushuma兀iTT耵TunodeficiencyvirushepatitisCvirusribonucleicaciddeoxyribonucleicacidhypervaridbleregiontransmissionelectronmicroscopyvir

2、us一1ikeparticletubulefonni几gagentantibody—dependentenhaneeⅡ1entreVersetranscriptionpol珊rasechainreactionphosphatebufferedsalinefluoresceinisothiacyanateiⅡ111unoglobulinGneonatalFcreceptorcytopathiceffect中文译名丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒丙型肝炎病毒核糖核酸脱氧核糖核酸高变区透射电镜病毒样颗粒管状形成因子抗体依赖的病毒感染增强作用反转录聚合酶链式反应磷酸缓冲盐溶液异硫氰

3、酸荧光素免疫球蛋白G胎儿Fc受体细胞病性效应第四军医大学硕士学位论文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯●⋯●⋯-⋯⋯⋯⋯●⋯⋯⋯⋯●●丙型病毒性肝炎母婴传播瓠制研究——丙型肝3嗡毒感染～胎盘蒜特长层细胞的体纠崾验研究生程勇前导师周永兴教授辅导教师聂青和副教授第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安，710038摘要丙型肝炎病毒(HcV)感染在全世界估计约1亿7千万人，多数感染者呈愚l生携带，且常进畏为肝硬化和肝细胞癌．在我国约有3％的人感染。IlcV经典的传播途径为经血液或血液制品传播，但1991年后献血员HcV的筛检已使输血后丙型肝炎大为减少。在发达国家HcV传播i垒径正在

4、发生改变，儿童非输血、血液制品的丙肝日渐增多。母婴间宫内、分娩时及产后感染已成为当前及今后研究的重要问题。现研究证实HCV可经胎盘引起胎儿感染，宫内感染是I{cV传播的一条重要途径。但目前的研究多数为流行病学调查及分子生物学研究，关于HcV如何在母婴间进行传播的具体机制研究报道甚少。HcV经胎盘感染胎儿必须首先突破胎盘屏障的第—道防线一一滋养层细胞。国外近年来离体实验研究发现^类免疫缺陷病毒(眦V)、流感A病毒、猫感染性腹膜炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒等许多病毒感染过程中存在抗体依巅的病毒感染增强作用(ADE)，HIV还可通过ADE作用感染胎盘。在HcV感染过程中是否也存在^DE

5、作用，HcV如何突破胎盘屏障感染胎儿，是否也具有与以上病毒相似的机制，目前尚未Ⅲ赧道。为探讨HcV母婴传播的可能机制本研究进行了如下工作：一、胎盘滋养层细胞的分离培齐滋养层细胞的分离培养实验参照国内外相关．'．第四军医大学硕士学位论文捅要●⋯⋯●●⋯●⋯⋯●⋯⋯●⋯●⋯●⋯●●●●⋯⋯⋯⋯⋯⋯●⋯⋯⋯⋯●⋯⋯⋯⋯●文献并加以改进采用胰蛋白酶消化法消化．^《月胎盘绒毛组织，制成单细胞悬液，以35％及45％两层Perco儿密度梯度分离煳匕单细胞悬液，以得到滋养层细胞进行体外培养。经免疫荧光染色及透射电镀舰察证实，改瓦后的分离纯化方法得到了较高纯度的滋养层细胞，为进一步探讨HcV母婴传播

6、的机制奠定了细胞学赛验基础。二、滋养层细胞免疫球蛋白Fc受体(IgGFcR)的检测及鉴定：IgcFcR的存在是病毒通过ADE作用感染细胞的必要备件之一，因此，本研究通过免疫细化染色植坝4滋养层细胞上FcvRIII(cDl6)的表达，结果显示入胎盘滋养层细舱表面有FcRIII(CDl6)表达，并且在胎盘绒毛组织中FcvRIII(cDl6)仅分布于胎盘屏障的最外层，即滋养层细胞昙，体外分离培养的滋养层细胞也可检测到FcRIII(cDl6)表达，从而为进一步探讨HCV母婴传播过程中是否可能存在ADE途径提供了免疫学实验依据。三、Hcv对滋养层细胞的感染实马佥：用Hcv阳性血清直接感染细胞

7、耍接近自然感染的状态，直接感染法是目前研究HcV感染细胞的主要方法。本实验中以HcVRNA阳性血清对分离纯化后的滋养层细胞进行体外感染试验，收集感染后不同时间的细胞培养上清及细胞爬片。应用定

8、}生及定量RT—PcR法检测感染后细胞培养上清中HcVRNA均为阳性：透射电镄观察HcV感染后滋养层细胞的超微结构发生了类似黄病毒科病毒感染后的改变，主要表现为溶酶体大量增生，粗面内质网增生，脂滴减少，出现空泡状结构，并可观察到病毒样颗粒。间接免疫荧光法检测发瑗感染后的滋养层细胞