西安和郑州地区丙型肝炎患者的hcv基因分型论文

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1、西安和郑州地区丙型肝炎患者的HCV基因分型论文.freelor-phism，restrictionfragmentlengthAbstract:AIMToinvestigatethegenotypesofHCVintheHCVinfectedsamplesinXi’anandZhengzhou.METHODSGenotypesofHCVinedbyrestrictionfragmentlengthpolymorphism（RFLP）analysisofthe5’untranslatedregions（UTR）ofdifferentHCVs.F

2、orty-sixHCVRNAposi-tivesamplesfromXi’anandfortyfromZhengzhouongtheforty-sixsamplesfromXi’an:25/46（54.3%）ixed-genotypeongthosefromZhengzhou:19/40（47.5%）ixed-genotypeixed-genotypeinantisolatesaregenotype1b，folloolL-1异硫氰酸胍，25molL-1柠檬酸三钠，pH7.0，0.1molL-12-巯基乙醇和5gL-1十二烷基肌氨酸钠）裂解，等

3、体积水饱和酚，氯仿异戊醇抽提两次后，乙醇沉淀，沉淀物溶于11μL1gL-1DEPC水，于70℃水溶变性10min，加入4μL5×M-MLVbuffer，1μL10molL-1dNTP，2μL0.1molL-1DTT，0.6μL随机引物，16URNasin，200UM-MLV，总反应体积为20μL，37℃水浴1h，合成cDNA.1.2.2HCVcDNA的套式PCR扩增两对引物H1/H2，H3/H4选自HCV5’NCR区基因，将反转录产物进行5’NCR套式PCR扩增后得到一条252bp的扩增片段.1.2.3限制性长度多态性分析（RFLP）第2轮P

4、CR产物纯化回收，溶于50μLTE（pH8.0），取其8μL加入1μL10×酶反应buffer，10U的如下内切酶:（a）HaeⅢ（b）HinfI（c）Bsh1236I或（d）ScrFI，37℃保温4h，消化产物40gL-1琼脂糖胶电泳，EB染色后，紫外灯下观察橙红色荧光带.1.2.45’NCR区限制性酶切图谱的预测见Fig1.图15’NCR区限制性酶切图谱的预测略2结果2.1限制性酶切产物电泳图谱见Fig2.图25’NCR区RT-PCR扩增产物限制性酶切电泳图谱略2.2RFLP基因分型结果2.2.1西安地区HCV基因型46例HCVRNA阳性

5、血清标本中，25例（54.3%）为1b型，17例（37.0%）为2a型，4例（8.7%）为1b/2a混合感染.2.2.2郑州地区HCV基因型40例HCVRNA阳性血清标本中，1a型3例（7.5%），1b型19例（47.5%），2a型13例（32.5%），1b/2a混合感染4例（10.0%），1a/1b混合感染1例（2.5%）.3讨论HCV基因组具有很高的变异性.根据HCV全基因序列或经PCR扩增后的基因序列片段的同源性，HCV可分为6型50多个亚型［1］，型间的变异程度可达33%［3］.越来越多的资料表明，不同型HCV的病毒血症、病情严重程度

6、和对干扰素治疗的反应均各不相同，说明HCV基因的变异可能与丙肝的慢性化及HCV相关的肝细胞癌的发生密切相关.目前对世界各地获得的HCV病毒株的基因型别分析表明，不同型HCV有一定的地区分布［4］.如欧美国家HCV1-3型常见，其中1a型占绝大多数;远东包括中国、日本的大部分地区，1b，2a，2b型常见，1b型为主要的优势株;3型主要分布在印度、巴基斯坦、泰国和新加坡等国家;4a型主要分布在中东、埃及和中非地区;5a型以南非地区为主;6a型则仅在越南、马来西亚等东南亚国家及中国的香港、澳门发现.我们报道了西安和郑州地区的HCV基因型分布，发现两

7、地患者中HCV型分布基本相似，均以1b型为主，其次为2a型，并有一定的混合感染.同北京［5］、乌鲁木齐［6］、广州［7］、贵州［8］、泰安［9］等地报道结果相比，西安与郑州地区2a型所占比例偏高，分别为36.96%和32.50%..ThepletecodingsequenceofhepatitisCvirusgenotype5a，thepredominentgenotypeinSouthAfrica［J］.BiochemBiophysResmunicat，1997;236（1）:44-49.［5］TangXM，SongHB，Lied），199

8、7;4（3）:135-136.［6］，ZhaiQ，SunHM，ZhangYX.StudyofHCVgenotypesined），1997;14（5）:265-266