西安和郑州地区丙型肝炎患者的hcv基因分型

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1、西安和郑州地区丙型肝炎患者的HCV基因分型关键词:C型肝炎样病毒属;基因型;多态性，限制性片段长度摘要:目的了解西安和郑州地区丙型肝炎病毒（HCV）感染的基因型，比较两地基因型分布的差异.方法采用限制性长度多态性分析（RFLP）法对采自西安地区的46份和郑州地区的40份HCVRNA阳性标本进行HCV基因型分型研究.结果西安地区46份标本中，25份（54.3%）为1b型病毒，17份（37.0%）为2a型病毒，4份（8.7%）为1b/2a混合型病毒;郑州地区40份标本中，19份（47.5%）为1b型，13

2、份（32.5%）为2a型，3份（7.5%）为1a型，4份（10.0%）为1b/2a混合型病毒，1份（2.5%）为1a/1b混合型病毒.结论两地的优势株均为HCV1b型，其次为2a型，郑州地区有1a型菌株的发现.　　Keyor-phism，restrictionfragmentlength　　Abstract:AIMToinvestigatethegenotypesofHCVintheHCVinfectedsamplesinXi’anandZhengzhou.METHODS　GenotypesofHCV

3、inedbyrestrictionfragmentlengthpolymorphism（RFLP）analysisofthe5’untranslatedregions（UTR）ofdifferentHCVs.Forty-sixHCVRNAposi-tivesamplesfromXi’anandfortyfromZhengzhouongtheforty-sixsamplesfromXi’an:25/46（54.3%）ixed-genotypeongthosefromZhengzhou:19/40（47.

4、5%）ixed-genotypeixed-genotypeinantisolatesaregenotype1b，follool・L-1异硫氰酸胍，25mol・L-1柠檬酸三钠，pH7.0，0.1mol・L-12-巯基乙醇和5g・L-1十二烷基肌氨酸钠）裂解，等体积水饱和酚，氯仿异戊醇抽提两次后，乙醇沉淀，沉淀物溶于11μL1g・L-1DEPC水，于70℃水溶变性10min，加入4μL5×M-MLVbuffer，1μL10mol

5、2539;L-1dNTP，2μL0.1mol・L-1DTT，0.6μL随机引物，16URNasin，200UM-MLV，总反应体积为20μL，37℃水浴1h，合成cDNA.　　1.2.2HCVcDNA的套式PCR扩增两对引物H1/H2，H3/H4选自HCV5’NCR区基因，将反转录产物进行5’NCR套式PCR扩增后得到一条252bp的扩增片段.　　1.2.3限制性长度多态性分析（RFLP）第2轮PCR产物纯化回收，溶于50μLTE（pH8.0），取其8μL加入1μL10×酶反应buffe

6、r，10U的如下内切酶:（a）HaeⅢ（b）HinfI（c）Bsh1236I或（d）ScrFI，37℃保温4h，消化产物40g・L-1琼脂糖胶电泳，EB染色后，紫外灯下观察橙红色荧光带.　　1.2.45’NCR区限制性酶切图谱的预测见Fig1.　　图15’NCR区限制性酶切图谱的预测　略　　2结果　　2.1限制性酶切产物电泳图谱见Fig2.　　图25’NCR区RT-PCR扩增产物限制性酶切电泳图谱　略　　3讨论　　HCV基因组具有很高的变异性.根据HCV全基因序列或经PCR扩增后的基因序

7、列片段的同源性，HCV可分为6型50多个亚型［1］，型间的变异程度可达33%［3］.越来越多的资料表明，不同型HCV的病毒血症、病情严重程度和对干扰素治疗的反应均各不相同，说明HCV基因的变异可能与丙肝的慢性化及HCV相关的肝细胞癌的发生密切相关.目前对世界各地获得的HCV病毒株的基因型别分析表明，不同型HCV有一定的地区分布［4］.如欧美国家HCV1-3型常见，其中1a型占绝大多数;远东包括中国、日本的大部分地区，1b，2a，2b型常见，1b型为主要的优势株;3型主要分布在印度、巴基斯坦、泰国和新加

8、坡等国家;4a型主要分布在中东、埃及和中非地区;5a型以南非地区为主;6a型则仅在越南、马来西亚等东南亚国家及中国的香港、澳门发现.我们报道了西安和郑州地区的HCV基因型分布，发现两地患者中HCV型分布基本相似，均以1b型为主，其次为2a型，并有一定的混合感染.同北京［5］、乌鲁木齐［6］、广州［7］、贵州［8］、泰安［9］等地报道结果相比，西安与郑州地区2a型所占比例偏高，分别为36.96%和32.50%..Thepletecodingsequence