马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hIL12表达载体构建.pdf

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1、第37卷第4期2014年8月遵义医学院学报V0I．37No．4JournalofZunyiMedicalUniversityAug．2014马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hiLl2表达载体构建杨加伟，李伟，葛正龙(遵义医学院生物化学教研室，贵州遵义563099)[摘要]目的克隆马铃薯块茎特异性的高效启动子Ppatatin并构建其驱动的人白细胞介素一12(hiLl2)植物表达载体。方法提取马铃薯基因组DNA作为模板，根据Genebank数据库信息设计Ppatatin序列特异性引物，通过PCR扩增获得Ppatatin片段，并进行测序鉴定；利用PLACE等数据库对序列进行启动子元件分析；通过重

2、叠PCR、限制性内切酶酶切、体外连接、转化等技术，以双元载体pCambia～2301为骨架，构建Ppatatin驱动的hiLl2表达载体。结果成功从马铃薯基因组中扩增得到了1019bp大小的启动子片段，序列分析表明该片段含有典型的启动子元件如TATA—box，以及一些组织特异性的相关响应元件，符合组织特异性启动子的特征；成功获得了基于pCambia一2301的Ppatatin驱动的hiLl2植物表达载体。结论获得的Ppatatin启动子及其驱动的hiLl2表达载体，为提高hiLl2在植物生物反应器中表达量以及优化马铃薯生物反应器打下了基础。[关键词]Ppatatin启动子；人白细胞介素一12；

3、表达载体；植物生物反应器[中图法分类号]Q785[文献标志码]A[文章编号]1000—2715(2014)04-0387-06Cloningoftuberspecificpromoterfrompotato(Solanumtuberosum)anditsapplicationinhumanIL——12expressionvectorconstructionfiawei，LiWei，GeZhenglong(DepartmentofBiochemistry，ZunyiMedicalUniversity，ZunyiGuizhou563099，China)[Abstract]ObjectiveToCl

4、onetuberspecificpromoterPpatatinfrompotatoandtoconstructhumanIL一12(hiLl2)plantexpressionvectordrivenbythispromoter．MethodsSpecificprimersweredesignedbasedonGenebankdatatoamplifythePpatatinfragmentusinggenomicDNAofpotatoastemplates．ThedatabasessuchasPLACEwereusedforanalysisofpromoterelements．Techniqu

5、esofoverlapPCR，restrictedenzymedigestion，DNAligationandtransformationwereperformedtoconstructhiLl2expressionvectordrivenbyPpatatinusingpCambia一2301asbasicvector．ResultsThe1019bpofpromoterfragmentwasobtainedfrompotatogenome．ThesequenceanalysisshowedtypicalpromoterelementssuchasTATA—boxandseveraltissu

6、especificresponseelements，whichidentifywiththecharacteristicsoftissuespecificpromoter．ThehiLl2expressionvectordrivenbyPpatatinwasthenconstructedsuccessfully．ConclusionTheobtainingofPpatationandhIL12expressionvec-totwouldplayanimportantroleforimprovingtheexpressionlevelofhiLl2inplantbioreaetorandopti

7、mizingthepotatobioreactor．[Keywords]promoterPpatatin；hiLl2；expressionvector；plantbioreactor植物生物反应器具有操作简便、产物活性高、白，在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B成本低、易扩大规模等优点，与微生物及动物细胞细胞活化、增殖与分化，以及在炎症反应中均起着等其它生物反应器相比有独特的优势，因此在细胞