鸡卵清蛋白启动子克隆及特异性表达质粒构建

《鸡卵清蛋白启动子克隆及特异性表达质粒构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据学校代码：10225学号：S13155学位论文鸡卵清蛋白启动子克隆及特异性表达质粒构建指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：星、、厶璺天>各天安铁洙教授硕士2013年4月东北林业大学学科专业：发育生物学论文答辩日期：2013年6月授予学位日期：2013年6月答辩委员会主席：论文评阅人：聋宣厶符素大学万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S13155DissertationfortheDegreeofMasterChickenOviductalbuminpromot

2、ercloningandSpecificityexpressingplasmidconstructingCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：醪白ZhihaoProf．AnTiezhuMasterDevelopmentalBiologyJune，2013NortheastForestry万方数据摘要利用转基因动物生物反应器技术来进行人类药用蛋白的生产，在研究生物学领域和开发生物技术方面

3、具有较为广泛的应用。目前有许多的人类药用蛋白，譬如单克隆抗体等都是利用工业生物反应器技术生产，但这样一种体系的建立时间周期长并且经济成本相对比较高。随着人们对药用蛋白的需求的日益增长，研制一种新型的既经济又能够有效生产药用蛋白的生物反应器成为了新的研究热点。家禽作为转基因动物生物反应器具有生产周期短，容易管理和规模化并且很经济等优点，虽然相关领域的技术研究已经趋于成熟，但是转基因禽类的技术研究仍未完善。本研究根据GeneBank中已发表的卵清蛋白基因序列设计引物扩增卵清蛋白OV5’端启动调控序列，得到一条约为3000bp特异

4、性扩增产物。将扩增产物连接入pEASY-T1载体中并进行序列测定，结果证明我们成功克隆出了鸡卵清蛋白基因调控区。将克隆得到的鸡卵清蛋白基因特异性启动子插入本实验室保存的表达载体pAcGFPl-N1中，构建成鸡输卵管特异表达载体。将构建的质粒利用脂质体转染法转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡胚胎成纤维细胞进行瞬时表达以验证鸡卵清蛋白基因特异性启动子的特异性。本研究的研究结果如下：(1>利用鸡心组织DNA扩增获得经PCR和酶切鉴定约在3000bp处出现特异条带的卵清蛋白OV5’端启动子基因。对所获得的基因进行序列分析，其与GenBan

5、k中相应序列的同源性为99．27％。(2)利用克隆获得的卵清蛋白OV5’端启动子基因，与表达载体pAcGFPl-N1构建获得经PCR、酶切和测序鉴定正确的表达载体50V-GFP。(3)利用脂质体转染法将50V二GFP质粒转染入鸡输卵管上皮细胞和鸡胚胎成纤维细胞中。在48h后，鸡输卵管上皮细胞出现绿色荧光，而鸡胚胎成纤维细胞未显示出绿色荧光。综上所述，本研究成功运用克隆获得的卵清蛋白OV5’端启动子基因与表达载体pAcGFPl-N1连接构建表达载体50V-GFP，利用其转染鸡输卵管上皮细胞和鸡胚胎成纤维细胞，验证了卵清蛋白OV

6、5’端启动子基因的特异性，为转基因禽类生物反应器的研究奠定了基础。关键词鸡；卵清蛋白启动子；克隆；潘陛检测万方数据AbstractAbstraetProducehumanpharmaceuticalproteinsbybioreactortechnologyoftmnsgenicanimal，hasthemorewidelyusedinthefieldofbiologyandbiotechnologyresearchanddevelopment．Therearemanyhumanmedicalprotein，suchasmo

7、noclonalantibody，Wasusingindustrialbioreactorsproduction．However,suchasystemisrelativelyhighwiththelongperiodoftimeandeconomiccosts．Withthegrowingneedsofpharmaceuticalproteins，todevelopaneweconomyandtheefficientproductionofpharmaceuticalproteinsbioreactorhasbecomea

8、newhotspot．Poultryasatransgenicanimalbioreactorproductionhasveryeconomicaladvantages澌t}1shortcycle，easytomanageandscale．Alotofresearchapplicatedc