高羊茅FaChit1启动子的克隆及其与gus基因融合表达载体的构建

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1、万方数据分子植物育种，2010年，第8卷，第4期，第725—729页MolecularPlantBreeding,2010，V01．8，No．4，725—729研究报告ALetter高羊茅屁吼如J启动子的克隆及其与gus基因融合表达载体的构建王健l安康学院农学与生命科学学院，安康，725000；2西北大学西部资源和生物技术教育部重点实验室，西安，710069通讯邮件，waagiiaaswj@163．tom摘要本研究以获得的凡饥豇J基因eDNA序列设计引物，采用染色体步移技术从高羊茅基因组中分离了一段FaChitl基因启动

2、子区域。序列分析结果显示，该启动子长度为935bp，含有保守性元件TATA和CAAT．Box，以及与植物逆境胁迫应答相关的多个顺式作用元件，如W-box、ABRE、MYB及MYC转录因子结合位点等。另外构建了含不同长度觚矗J启动子区域(-935bp、一65lbp、一233bp)与舭s基因融合植物表达载体，分别命名为pFaChitlP—I、pFaChitIP-Ⅱ和pFaChitlP—m，为进一步进行该启动子的功能分析奠定基础。关键词高羊茅，FaChitl基因，启动子克隆，gus基因Cloningof屁劬如JPromoter

3、fromTallFescueandConstructionofthePro—moter-gusExpressionVectors胁盯gJian1CollegeofAgricultureandLifeSciences,AnKangUniversity,Ankang,725000；2KeyLaboratoryofResourceBiologyandBiotechnologyinWesternChina(MinistryofEducation),InstituteofLifeScienceNorthwestUniversity

4、,Xi’an,710069Correspondingmail，wangiianswj@163．cornIX)l：10．3969／mpb．008．000725AbstractAccordingtothesequenceoftheFaChitlgenefragmentobtained，weisolatedFaChitlgenepromoterregionfromtallfescue(Festucaarundinace动genomicDNAusinggenomewalkingmethod．Sequenceanalysisre-

5、vealedthattheFaChitlpromoterregionwas935bplongandcontainedbothtypicalTATAandCAATboxes．aswellasseveralpotentialcis-actingelementsrelatedtoplantstressresponses，suchasW—box，ABRE，MYBandMYCtranscriptionfactorbindingsites．Furthermore，Wehaveconstructedthreepromoter-guse

6、xpressionvectorswithdifferentpromoterdeletions(-935bp，一651bp，一233bp)inthisresearch，designatedaspFaChitlP—I，pFaChitlP—IIandpFaChitIP一Ⅲ，respectively，whichlaidthebasisforfurtherinvestigatingthefunctionof肛Chitlgenepromoter．KeywordsTallfescue(Festucaarundinace曲，FaChit

7、lgene，Promotercloning，gus启动子是一段能与RNA聚合酶及其它转录因子特异性结合、决定基因转录起始的DNA片段。目前，基因工程中所采用的大多为组成型启动子，在其启动下抗逆基因的持续强表达虽然可以提高植物的抗逆能力，但可能导致转化植株异常发育的情况。相反，胁迫诱导型启动予则不会出现上述情况，因为只有在逆境胁迫时外源抗性基因才得以诱导表达(CurtandRushton，2005)。因此分离与弄清楚植物启动子的分子本质不仅是研究基因表达调控机制的重要内容，而且也是构建基因工程表达载体的关键。WWW．mol

8、plantbre圮d．org／d0V10．3969／mpb．008．000725植物病源相关基因肩动子中包含多种在抗病反应中起重要的顺式作用元件，其中包括受多种不同病原菌诱导的GCC．box(AGCCGCC)(Zhoueta1．．1997；Dubouzeteta1．，2003)；受创伤及部分病原诱导的W-box[(T