自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用.pdf

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1、国际妇产科学杂志2013年12月第40卷第6期JIntObstetGynecol，December2013，Vo1．40，No．6·561·论著·自噬在顺铂致宫颈癌He1a细胞死亡中的作用王赞宏张晶张娜白淘【摘要】目的：研究自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用，以及自噬基因Beclin1对Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法：不同浓度顺铂作用Hela细胞后，丹磺酰戊二胺(MDC)法观察细胞中自噬体的形成，蛋白质印迹法(Westernblot)检测自噬基因Beclin1和LC3蛋白的表达；将自噬基因Beclin1的真核表达载体pcDNA3．1(+)-Bec

2、linl转染Hela细胞，Westernblot检测Beclin1在Hela细胞中的蛋白表达，四甲基偶氮唑蓝(Mar)比色法检测顺铂对Hela半数抑制浓度(IC)的变化，流式细胞仪检测自噬细胞与凋亡细胞的百分率。结果：顺铂作用Hela细胞后，细胞内自噬体形成增加，自噬蛋白Beclin1和LC3表达增加，且均呈现浓度依赖性(P<0．05)；pcDNA3．1(+)一Beclin1转染Hela细胞后，Beclin1蛋白表达增加(P<0．05)，MTr检测Ic由转染前的1．0mg／L下降到0．5ms／L，凋亡细胞百分率和自噬细胞百分率均升高，与对照组相比差异有统计学

3、意义(尸<0．05o结论：自噬参与了顺铂对宫颈癌Hela细胞的细胞毒性作用，自噬基因Beclin1过表达能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。【关键词】Beclin1；顺铂；自噬；细胞凋亡；宫颈肿瘤EfectsofAutophagyonC~latinInducedCervicalCancerHelaCellsDeathinVitroWANGZan一，ZHANGJi，ZHANGNa，BAITo．DepartmentofObstetricsandGynecology，ShanxiAcademyofMedicalSciences，ShanxiDaYiHospital

4、，Taiyuan030032，China(WANGZan-hong，ZHANGJing，ZHANGNa)；TheFirstHospitalofShanxiMedicalUnivers，Taiyuan030001，China(BAlToo)Correspondingauthor：WANGZan-hong，E-mail：wangzanhong@126．com【Abstract】Objective：Toinvestigatetheefectsofautophagyoncisplatin-inducedcervicalcancerHelacelldeath，ando

5、bserveimpactofBeclin1onsensitivityofHelacellstocisplatininvitro．Methods：Helacellsweretreatedwithcisplatinindifferentconcentration，andMDCdyeingwasexploredtomeasuretheformationofautophagicvacuolesandWesternblotwasusedfordetectingproteinexpressionofBeclin1andLC3．Theeukaryoticexpressio

6、nvectorofBeclin1wastransfectedvialipofectamineintoHelacells．MTI"assaywasemployedtoobservetheefectontheIC5ovalueofcisplatin，andflowcytometrywasemployedtoobservethepercentageofautophagiccellsandapoptoticcells．Results：TheautophagyvesicleswereincreasedandtheexpressionofBeclin1andLC3wer

7、esignificantlyimprovedinadose—dependentmannerinHelacellstreatedwithcisplatin(P<0．05)．TheeukaryotieexpressionvectorpcDNA3．1(+)一BeclinlsignificantlyimprovedtheexpressionofBeclinlinHelacells(P<0．05)．MTFassayshowedtheIC50valueofcisplatindecreasedfrom1．0mg／Lto0．5mg／L(P<0．05)，andmoreauto

8、phagiccellsandapoptoticcel