凋亡及自噬在hvj-e致a549和a549ddp细胞死亡中的作用机制

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2、Ｓ為－尸＇；‘准９江苏扬州２２５００９＇＾、指导教师姓名：薛整风研究员，张泉副教授，扬州大学，，卷：申请学位级别：硕去学科专业名称动物学，２０？：２０１５年６论文提交日期：１５年４月论文答辩日期月２０１５学位授予单位：场州大学学位授予日期：年６月歷员備羞＾、＇，．：《沁＜：％知；＇每—、＾－於备令声．與；ｙ餐；養寺转若齡霉基＇－Ｔ—續＾＾二一續攀ＨＶＪ－Ｅ９调亡及自隘在致Ａ５４９和Ａ５４／ＤＤＰ细胞死ｔ中的作用机制Ｍｅｃｈａｎ－ｉｓｍｏｆａｏｐ１：ｏｓｉｓ

3、ａｎｄａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎＨＶＪＥｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｐｄｅａｔｈｉｎＡ５４９ａｎｄＡ５４９／ＤＤＰ研巧生：朱慧霞学科；动物学导师：张泉副教授薛整风教授本研巧由国家自然科学基金（３１３０２０４２）江苏省自然科学基金（ＢＫ２０１３０４０５）资助朱慧霞ＶＪ－４９／＝调亡及自巡在ＨＥ致化４９和Ａ５孤Ｐ巧胞死亡中的作用机制＼调ｔＪ－Ｅ致Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞死ｆ：中的作：及自隨在ＨＶ用机制研究生：朱慧霞导师：张泉副教授薛整风教授中女摘要一，肺癌

4、是当今世界最常见的恶性肿瘤之，其发病率和死亡率都有明显升商的趋势肺一一癌是种多因素的疾病，。目前吸烟是引起肺癌的主要因素之Ｊ３市癌的治疗主要Ｗ手术治Ｗ一、疗化学治疗和放射治疗为主，但存活率普遍不高，所，我们仍需寻求种新的方法来ｖ－治疗肺癌。，灭活的仙台病毒（ＨｅｍａｌｕｔｉｎａｔｉｎｇｉｍｓｏｆＪａａｎＥｎｖｅｌｏｐｅＨＶＪＥ研究表明ｇｐ，）不。仅可Ｗ作为载体传递抗肿瘤药物，激活多重抗肿瘤免疫，同时还能直接杀伤肿瘤在本研ＨＶ－Ｅ可直Ａ５４、Ａ５４９ＤＤ巧究中，我们发现Ｊ接诱导人肺腺癌细胞（９耐顺拍人肺腺癌细

5、胞／）（死ｔ，并初步探讨其抗肿瘤机制。－ＨＶＪ－ＥＡ５４９Ａ５４９／ＤＤＰＲＩＧ－ＩＩＦＮ首先、，，我们通过实验观察作用细胞后和Ｐ的表－ＥＲＩＧ－Ｉ达情况。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ检测显示，，经ＨＶＪ刺激后，的表达量增加诱导－圧Ｎ－－Ｖ９ＡＰ的产生，并呈剂量效应关系。送表明ＨＪＥ与Ａ５４、５４９／ＤＤＰ细胞发生了融合，－４９ＡＤＤＰ－－断裂的病毒基因组被ＲＩＧＩ识别，从而导致Ａ５、５４９／细胞中的圧ＮＰ含量随ＨＶＪＥ浓度的増加而增加。－ＤＰ－其次，我们探索ＨＶＪＥ对Ａ５４９、Ａ５４９／Ｄ细胞繁殖和生长的影

6、响。用ＨＶＪＥ处理Ａ５４９、Ａ５４９／ＤＤＰ细胞，倒置显微镜下观察，发现两种细胞均出现生长停滞、皱缩和破裂－的现象，同時用ＨｏｅｃｈｓＷ２５８染色试剂盒可Ｗ观察到细胞染色质皱缩，细胞核碎裂。ＣＣＫ８￣－Ｅ分别处理Ａ５４９Ａ检测结果显示，用１００８００ＭＯＩＨＶＪ、５４９／ＤＤＰ细胞２４小时后，细胞，。流式细胞术ＦＡＣＳ法检测显示的活力与对照组相比明显下降并呈剂量依赖关系，经ＨＶＪ－Ｅ处理后，Ａ５４９、Ａ５４９／ＤＤＰ细胞均产生明显的调亡，且呈剂量依赖关系。由此可Ｗ－Ｅ可５４９说明ＨＶＪＷ直接导致Ａ、Ａ５４９／ＤＤＰ细

7、胞调ｔ：。Ｗ－ｔＢｔ５３Ｂｄ２／Ｂａｘ、Ｃａｓａ化５３然后，我们用ｅｓｅｒｎｌｏ法检测ｐ、ｐ信号通路的相关蛋白。ｐ－Ｅ浓度増加有升高趋势Ｂｃ－／Ｂａｘ－－的表达量随ＨＶＪ，ｃａｓａｓｅ８、ｃａｓａｓｅ９、，ｌ２却呈下降趋势ｐｐ－－－－３、ＰＡＲＴ、Ｃａｓａ８、Ｃａａ９ＨＶＪＥ浓度ｃａｓｐａｓｅｐｓｅｓｐｓｅ随升高而活性升高，最终都可检测到一－Ａ５４９碎裂的形式ＨＶＪＥ、Ａ５４９／ＤＤＰ细胞调亡是Ｃａｓａｓｅ。为进步确认诱导的否与ｐ通路扬州大学硕±毕业论文－－－，我们用ｃａｓ化广谱ＺＶＡＤＦＭＫ分别预处理细胞后加

8、ＨＶＪＥ处理有关ｐａ抑制剂，结果显－，ｃａｓａｓｅ３和ＰＡＲＰ被显著抑制且细胞调亡率也被显著抑制ａｓａｓｅ示碎裂的ｐ。该实验证明Ｃｐ－信号通路参与ＨＶＪＥ诱导的Ａ５４９、