SDS-PAGE电泳操作流程―含考染 银染 碘染.doc

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1、SDS-PAGE操作流程——考染1、准备溶液30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺)10g1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45µm微孔滤膜过滤除菌

2、和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HC

3、L名称用量备注Tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4、【保存条件】4℃保存。【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8

5、):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。）【保存条件】4℃保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS名称用量备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加

6、入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】保存条件：    4℃保存。注意事项：    易燃，有腐蚀性，请注意防护。    易挥发，使用后请盖紧瓶盖。    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。保存条件：    4℃保存。注意事项：    易燃，有腐蚀性，请注意防护。    易挥发，使用后请盖紧瓶盖。    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套对人体有害，请注意防护。10%过硫酸铵溶液-----10%(

7、w/v)AP【组分浓度】10%(w/v)过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4℃保存【保存条件】4℃保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用1周左右，超过期限会失去催化作用5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycinebuffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)1000ml500ml0.125MTri

8、s15.1g1.25Mglycine(甘氨酸)94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g【配制方法】称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/LTris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】室温保存【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。电泳缓冲液