甲状腺功能亢进对大鼠肝脏铁含量及铁转运相关蛋白mRNA表达的影响.pdf

《甲状腺功能亢进对大鼠肝脏铁含量及铁转运相关蛋白mRNA表达的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、广东医学2015年4月第36卷第8期GuangdongMedicalJournalApr．2015，Vo1．36，No．8甲状腺功能亢进对大鼠肝脏铁含量及铁转运相关蛋白mRNA表达的影响术赵晋英，王培培，黄作良，刘众齐，马新华，黄泽智，李艳伟邵阳医学高等专科学校检验系、湖南省邵阳市分子生物学诊断重点实验室(422000)【摘要】目的通过检测甲状腺功能亢进(甲亢)时大鼠肝脏铁含量和铁蛋白(Fn)、转铁蛋白受体1(TfR1)、二价金属离子转运体1(DMT1)、膜铁转运蛋白1(Fpn)mRNA的表达，探讨甲亢对大鼠肝脏铁代谢的影响。方法雌性SD大鼠

2、54只，随机分组，每组6只，8个模型组经左旋甲状腺素钠灌胃给药建立甲亢模型，1个对照组灌服生理盐水。于第1—8周末各取1个模型组大鼠肝脏，行组织切片后经DAB增强的Per1s铁染色检测肝脏铁含量。经RT—PCR检测大鼠肝脏Fn、TfR1、DMT1、FpnmRNA的表达。结果模型组大鼠肝脏铁染色明显高于对照组，且随着时间的延长明显增强。对照组大鼠肝脏表达FnH、FnL、TfR1、DMT1和FpnmRNA。模型组FnLmRNA在1～3周与对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)，而4～8周均略低于对照组(P<0．05)。模型组FnHmRNA随造

3、模时间延长逐渐升高(P<0．05)，且各时间点表达均高于对照组。模型组TfR1mRNA和DMT1mRNA各时间点表达量均高于对照组(P<0．05)。模型组FpnmRNA的表达量随造模时间延长逐渐降低(P<0．05)，且在各时间点均明显低于对照组。结论甲亢可引起大鼠肝脏铁含量增加，Fn、TfR1和DMT1mRNA表达升高，而FpnmRNA表达下降。肝脏铁含量升高可能与TfR1、DMT1和Fpn表达改变有关，肝脏Fn增加对升高的铁具有储存作用，防止铁超载对肝细胞的损害。【关键词】甲状腺功能亢进；肝脏；铁蛋白；转铁蛋白受体1；二价金属离子转运体1；

4、膜铁转运蛋白1甲状腺功能亢进(简称甲亢)是一种常见的由于重)。每天称重，按体重调整给药量，并记录大鼠饮食、甲状腺激素分泌过多所致内分泌疾病。临床上甲亢伴水量，行为指征。于第1～8周末各处死1个模型组大贫血的患者并不少见，贫血的出现可加重甲亢患鼠，对照组于实验末处死。取大鼠肝组织，一部分用者的高动力循环状态，给甲亢的治疗带来困难。国4％多聚甲醛固定，脱水后石蜡包埋，连续切片(4Ixm内外资料显示甲亢性贫血的发生与缺铁和(或)铁利厚)，用于铁染色；另一部分新鲜肝组织提取总RNA，用障碍有关，但具体机制不明。肝脏不仅是机体最行RT—PCR实验。主要

5、的储铁器官，且在铁稳态调节中处于核心地位。1．2方法2014年2—6月，本研究通过检测甲亢模型大鼠肝脏铁1．2．1DAB增强的Per1s铁染色肝组织切片脱蜡含量、与铁摄入有关的转铁蛋白受体1(transferrinre-复水后，置于现配5％HC1—5％亚铁氰化钾1：1混合液ceptor1，TfRI)、二价金属离子转运体1(divalentmetal30min；PBS冲洗后，置于现配3％H：O：去离子水20transporter1，DMT1)、与储铁有关的铁蛋白(ferritin，rain，去除内源性过氧化物酶；DAB显色30min，苏木素Fn

6、)、与铁输出有关的膜铁转运蛋白1(ferroportin1，复染。阴性对照：染色时不加HC1一亚铁氰化钾混合Fpn)等多个铁转运相关蛋白mRNA的表达。，进一步液。镜检，含棕黄色颗粒为阳性细胞。探讨甲亢对肝脏铁代谢的影响，这对揭示甲亢性贫血1．2．2RT—PCR检测铁转运相关蛋白mRNA表达的发病及其防治具有重要的价值。Trizol试剂(碧云天生物公司)提取肝组织总RNA。RT—1材料与方法PCR反应采用两步法，试剂均购自碧云天生物公司。检测大鼠FnH、FnL、TfR1、DMT1、FpnmRNA的表达，1．1造模与分组处理雌性SD大鼠54只购

7、自南华以甘油醛一3一磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参，引物序大学实验动物中心，体重(2004-10)g，室温18～25~C，列见表1(上海生物工程公司)。PCR仪(MyCycler，美相对湿度50％一70％条件饲养。将大鼠随机分为8个国Bio—Rad公司)设定条件：第一步95℃4min，1个循模型组和1个对照组，每组6只。模型组参照张彬环；第二步94cC30S，退火30s，温度见表1，72oC30s，共等的方法建立甲亢模型：研磨左旋甲状腺素钠(德国30个循环；第三步72~C延伸10min。5IxL扩增产物与1默克公司)，用生理盐水混悬，灌胃给药

8、(60g／100g上样缓冲液混匀后点于1．0％琼脂糖凝胶孔，电压体重，1次／d)。对照组灌服生理盐水(1mL／lO0g体150V，电泳约1h，凝胶成像后，经Phot