中药对哮喘大鼠il13 mrna和tnfα mrna表达及ige含量的影响

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1、中药对哮喘大鼠IL13mRNA和TNFαmRNA表达及IgE含量的影响:代继宏,王永红,周远大,何海霞【摘要】目的:探讨中药治疗对哮喘大鼠IL13mRNA和TNFαmRNA表达及IgE含量的影响.方法:ac)和上皮细胞(Epi)进行分类计数200个细胞,每张玻片计数2次,取平均值记录.1.2.2大鼠血清和BALF中IgE的测定全血离心(3000r/min,10min),取血清0.5mL注入Eppendorf管,用于血清IgE测定,取BALF0.5mL注入Eppendorf管,用于BALF中IgE测定.采用免疫放射双抗夹心法测

2、定血清和BALF中的IgE.将待测标本按1∶21体积比进行稀释,并充分摇匀.各编号管加入标准品(双管)或待测样品各200μL,并各加抗人IgE包被珠1粒,摇匀,45℃温育2h;蒸馏水冼3~4次;每管加125I抗人IgE200μL,室温(20±4)℃24h;洗涤;测1min的CPM值;以标准点为横坐标,CPM为纵坐标,对数做图,根据曲线计算待测物浓度;样品中总IgE浓度=测值×21.1.2.3大鼠肺IL13mRNA和TNFαmRNA表达按Trizol试剂盒要求提取肺组织总RNA.将RNA逆转录成cDNA进行PCR扩增反应.引

3、物设计参照文献[4-5]:IL13Forin→94℃20s→65℃40s→72℃1min,共32个循环,最后72℃10min.TNFα:94℃3min→94℃30s→54℃30s→72℃30s,共35个循环,最后72℃7min.扩增产物行琼脂糖凝胶电泳,对电泳条带进行吸光度值的半定量分析,以各标本mRNA条带的吸收度参数与内参基因条带的吸收度参数的比值做为该标本mRNA的表达参数.2.2对哮喘大鼠血清和BALF中总IgE的影响哮喘模型对照组血清和BALF中IgE的含量均较正常对照组和中药组明显升高(P<0.05),正常对照

4、组和中药组之间无统计学差异.IL13mRNA和TNFαmRNA表达哮喘模型组较正常对照组增高(P<0.05),而中药组较哮喘模型组降低(P<0.05,表2).表2哮喘大鼠血清和BALF中IgE含量和肺组织中IL13mRNA和TNFαmRNA的表达的比较3讨论本研究结果显示,哮喘模型组大鼠血及BALF中IgE含量明显高于对照组及中药治疗组(P<0.05),而其肺组织中IL13mRNA及TNFαmRNA的表达亦明显高于其他两组,表明IL13和TNFα可能参与哮喘的发生,而中药治疗可调节机体免疫功能[4-

5、7],本实验所用中药通过抑制IL13和TNFα的mRNA合成,减轻嗜酸性粒细胞等炎症细胞的聚集浸润,有利于炎症消退.我们参照祖国医学中治疗哮喘常用的方剂加味定喘汤,选用其中具有较强抗炎及免疫调节作用的几味中药材,杏仁、甘草、黄芩、芍药加苏子.但是,当几种中药中的有效成分进入机体后,会进一步通过药物配伍发生反应.“药动学相互作用论”认为,方剂药物配伍引起的疗效变化,是通过方剂体内成分的血药浓度及其药动学参数的变化而诱导的.但是,是何种成分或几种成分调节免疫细胞,并且具体调节的分子水平机制尚需进一步研究.【参考文献】[1]林嘉友.超

6、敏反应[A]//何维.医学免疫学[M].北京:人民卫生出版社,2005:301-308.[2]代继宏,符州,迟磊.雾化吸入加味定喘汤防治实验性大鼠哮喘的初步探讨[J].医学信息,2005,18(3):248-251.[3]SantingRE,OlymulderCG,ZaagsmaJ,etal.Relationshipsamongallergeninducedearlylatephaseairmationinconscious,unrestrainedguineapigs[J].JAllergyClinImmunol,1994,93

7、(6):1021-1030.[4]ArticlesR,SinghBB,KhorsanR,etal.Herbaltreatmentsofasthma:Asystematicreviea,2007,44(9):685-698.[5]LiXM.TraditionalChineseherbalremediesforasthmaandfoodallergy[J].JAllergyClinImmunol,2007,120(1):25-31.[6]ZhangB,B,RNAinlivertissueofratsethylnitrosamine[J]

8、.WorldJInfect,2007,7(1):21-24.[7]史恒军,梁军,侯军峰,等.养阴抗毒散对X线照射小鼠T细胞亚群及红细胞黏附功能的影响[J].第四军医大学学报,2004,25(11):1039-1041.

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