桂枝汤对脾虚大鼠nfat mrna，il4 mrna，ifnγ mrna的干预作用

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1、桂枝汤对脾虚大鼠NFATmRNA，IL4mRNA，IFNγmRNA的干预作用【摘要】目的：采用RTPCR方法来探讨桂枝汤对脾虚NFATmRNA，IL4mRNA，IFNγmRNA的影响以及干预Th1/Th2细胞漂移的机制.方法：40只大鼠随机分为空白对照组(A组)、脾虚组(B组)、桂枝汤大剂量组(C组)和桂枝汤小剂量组(D组)等4组，每组10只；用规范的脾气虚证大鼠模型造模方法将B，C和D组大鼠造模，B，C和D组分别用蒸馏水、桂枝汤大剂量、桂枝汤小剂量灌胃，标本采集后用RTPCR检测NFATmRNA

2、，IL4mRNA和IFNγmRNA表达水平.结果：脾虚组的NFATmRNA，IL4mRNA表达上调；而IFNγmRNA表达下调，经桂枝汤大、小剂量组治疗后，NFATmRNA，IL4mRNA表达下调，IFNγmRNA表达上调.结论：桂枝汤对Th1/Th2细胞漂移作用途径可能是通过下调NFATmRNA的表达，恢复了IFNγmRNA正常转录水平，进而下调IL4mRNA的表达，使脾虚大鼠Th1/Th2细胞达到一种新的平衡.【关键词】桂枝汤；活化T细胞核因子；白细胞介素4；γ干扰素0引言现代医学表明，

3、在生理条件下，Th1细胞和Th2细胞分泌的两类因子互相调整，相互制约，处于一种动态平衡状态.一旦两者平衡失调，细胞因子作用于细胞表面相应受体，活化信号转导因子(signaltransducerfactor,STF)，将刺激信号传至核内而发挥其基因转录的调节作用，使机体局部乃至全身发生病理反应［1］.我们通过观察脾虚证模型动物Th1细胞、Th2细胞中具有代表性的γ干扰素(interferonγ，IFNγ)、白介素4(interleuin4，IL4)以及T细胞核因子(nuclearfactorofact

4、ivatedTcells,NFAT)mRNA的表达以及桂枝汤对三者的影响，探讨脾虚证模型动物与Th1/Th2细胞漂移的关系以及桂枝汤对其的逆转作用.1材料和方法1.1材料SD大鼠40只，清洁级，雄性，体质量200~300g，由上海实验动物中心提供.在江西中医学院动物实验中心清结级25~27℃条件下饲养.SD大鼠在动物房适应性饲养1in，快速加热至沸腾，而后保持微沸状态15min，趁热抽滤，药渣中加入3倍蒸馏水，浸泡30min，快速加热至沸，微沸10min，趁热抽滤，弃药渣，合并滤液，水浴浓缩相当于生药1kg/

5、L的滤液，4℃保存.主要试剂与仪器有卵清蛋白、刀豆蛋白A（均为Sigma公司），Trizol(GibcoBRL公司)，Rmasin,MMLV（Promega公司），Tag酶（上海生工），并由上海生工合成引物，DNAmark(北京鼎国生物试剂公司)，PCR仪（PE480美国PERKINELMER公司），紫外分光光度仪（DU530美国BECKMAN公司），EagleEyeII成像分析系统(美国).1.2方法1.2.1模型建立先按初步规范的脾气虚证大鼠模型造模方法建模［2］.造模30d后大鼠表现符合中医学中的脾虚

6、症状.1.2.2给药除A组10只大鼠不需造模外，B，C和D组共30只大鼠按2结果实验各组的NFATmRNA，IL4mRNA，IFNγmRNA的影响(表2).B组的NFATmRNA，IL4mRNA表达上调（P<0.05）；而IFNγmRNA表达下调（P<0.05），经C组治疗后，NFATmRNA，IL4mRNA表达下调（P<0.05），IFNγmRNA表达上调（P<0.05），与正常组相比较，基本恢复了正常水平（P>0.05）.IFNγ，IL4，NFAT及βact

7、in的扩增产物经15g/L琼脂糖电泳，所示条带分别为405,360,392和512bp，符合设计的片段（图1～3）.表2实验各组NFATmRNA,IL4mRNA及IFNγmRNA的表达3讨论1986年Mosman等［6］证实CD4+（Thelper,Th）可以发展成功能不同的Th1和Th2亚群，它们各自产生特征性细胞因子.Th1细胞主要分泌干扰素γ(interferonγ,IFNγ),IL2,IL12等多种Th1型细胞因子；Th2细胞分泌的IL4，IL5，IL10等多种Th2型细胞因子.

8、Th1细胞和Th2细胞通过细胞因子的交互调节而互为调节细胞,从而形成复杂的细胞因子网络，例如由Th1细胞分泌的IFNγ是Th1细胞分化的重要的细胞因子，它可抑制Th2细胞的分化.IL4和IL10是Th2细胞分化的重要的细胞因子，可抑制Th1细胞的分化［1］.活化T细胞核因子(nuclearfactorofactivatedTcells，NFAT)是一类与众多信号传导途径相联系，具有广泛生理功能