蛋白质样品制备2009中文版.pdf

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1、GEHealthcare蛋白质样品制备赢在起点！差异表达分析一一蛋白谱的研究可选的步骤裂解/蛋白质抽提样品：血液、组织、细胞、细菌等SampleGrindingKit,ProteinExtractionBufferkits,triplePrep控制酶解NucleaseMix,ProteaseInhibitorMix一维电泳去除高丰度蛋白质二维电泳质谱AlbuminandIgGRemovalKit液相色谱富集蛋白质、多肽NHS,Streptavidin,ProteinA&G,PhosSpinTrapFe脱盐/缓

2、冲液更换/去除杂质脱盐PDfamily,SephadexG-25andG-10,Cleanupkit去除杂质浓缩样品VivaSpinfamily蛋白定量2DQuantkit,NanoVue过表达并纯化特异的蛋白一一用于结构和功能研究可选的步骤样品：天然来源或重组表达的裂解/蛋白质抽提SampleGrindingKit,ProteinExtractionBufferkits,triplePrep蛋白相互一维电泳控制酶解作用分析NucleaseMix,ProteaseInhibitorMix液相色谱质谱捕获蛋白质

3、和或去除标签GST,Histidine,MBP,Strep(ll),ProteinA/ProteinG脱盐/缓冲液更换/去除杂质PDfamily,SephadexG-25andG-10,Cleanupkit脱盐去除杂质浓缩样品VivaSpinfamily蛋白定量2DQuantkit,NanoVue2蛋白质抽提处理少量组织和细胞样品时，可直接用SampleGrindingkit，10分钟内在1.5ml离心管中加入蛋白抽提液，用研磨颗粒处理最多100mg的样品，提取蛋白质。在裂解液中加入Proteaseinhi

4、bitorMix可抑制蛋白酶的活性；加入NucleaseMix，降解DNA和RNA。处理人血清样本时，里面含有高浓度的白蛋白和IgG，可以直接用AlbuminandIgGremovalkit，采用离心管一次实现富集低丰度蛋白，去除高丰度蛋白的干扰。抽提哺乳动物细胞和酵母蛋白的缓冲液试剂盒哺乳动物细胞蛋白抽提缓冲液和酵母蛋白抽提缓冲液试剂盒基于有机缓冲试剂，温和的非离子去污剂以及不同盐和试剂的组合，可温和破碎细胞壁，释放出可溶蛋白。可在使用前根据应用的不同，直接添加其他的试剂如螯合剂、还原剂、或蛋白酶抑制剂到

5、抽提缓冲液中。两种缓冲液都适用于大部分的下游应用，包括色谱、电泳、免疫分析或酶分析。酵母细胞的机械破碎通常需要玻璃珠，而酵母蛋白抽提缓冲液试剂盒则省却了这个需要。试剂盒中包含了即用型的Zymolyase及酵母悬浮缓冲液。在细胞裂解时，酵母悬浮缓冲液与Zymolyase（一种消化酵母细胞壁的酶）共同使用。裂解之后得到的酵母沉淀物，即原生质球中，加入酵母蛋白抽提缓冲液，即可抽提出具生物活性的可溶蛋白。双向电泳的蛋白抽提缓冲液2-D蛋白抽提缓冲液专门为获得高质量的双向电泳结果而设计，提供便利的缓冲液配制和有效的蛋

6、白质提取。所有6种缓冲液都能与变性条件下的1-D和2-D电泳兼容，并可在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂混合物之类的试剂。大部分的缓冲液与2-D荧光差异凝胶电泳（2-DDIGE）中使用的CyDye™DIGEFluor兼容1。12-D蛋白抽提缓冲液-I不推荐与CyDyeDIGEFluorminimalDyes共同使用，而抽提缓冲液-III和-IV不适用于稀有样品的CyDyeDIGEFluor标记试剂盒。双向电泳用其它试剂为获得高质量的双向电泳结果，合适的上样量也是关键，所以可以采用2-DQuantkit，特异沉淀蛋白

7、质，在有非蛋白类干扰物质存在下精确测定蛋白质的含量。碱性蛋白的聚集通常是双向电泳的一个难点，采用Destreak试剂配合杯上样的方法可以有效解决碱性蛋白的拖尾问题。illustra™triplePrep试剂盒使用illustra™triplePrep试剂盒可以从单个样品（来自不同动物器官如肝，肾，脾，脑，肺，肠等器官的组织，或者哺乳动物细胞的培养物，例如，HeLa，NIH-3T3，CHO-K1，和HEK-293细胞等）中提取高质量的基因组DNA、总RNA以及变性的总蛋白质。使得分离产物在PCR反应、RT-P

8、CR、测序、Western印迹、双向电泳和LC-MS法等应用中有良好应用。使用总量极为有限的样品，如活组织切片，组织和肿瘤标本，分析获得关于基因表达、蛋白表达和基因组分析方面的信息。3富集蛋白质、多肽富集蛋白质、多肽因为不同样品的复杂性和动态范围，导致蛋白分离和分析是非常有挑战的，通常采用富集目标蛋白质的方法，提高后续分析的信号强度。因此需要自动的、可重复的样品制备方法，而把填料装填到Spin柱（SpinTrap