内质网应激参与介导脂多糖诱导的大鼠肝细胞凋亡-论文.pdf

内质网应激参与介导脂多糖诱导的大鼠肝细胞凋亡-论文.pdf

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1、法医学杂志2014年2月第30卷第1期·13·内质网应激参与介导脂多糖诱导的大鼠肝细胞凋亡季英磊,闰骏,王艳莎,刘夷嫦,谷振勇(南通大学医学院法医学系,江苏南通226001)摘要:目的探讨内质网应激在脂多糖(1ip0p0lysaccharide,LPS)诱导的肝细胞凋亡中的作用。方法肝细胞系BRL细胞培养.用LPS、内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)、内质网应激抑制剂4一苯基丁酸(4一phenylbutyricacid,4一PBA)分别或组合处理肝细胞。用M1Tr比色法检测细胞活力的变化,Heochst33258荧光染色检测细胞凋亡形态的变化,Annexin

2、V—FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78和内质网应激相关的凋亡蛋白CHOP、caspase一12和激活型casDase一3的表达。结果LPS引起肝细胞活力降低、细胞凋亡率明显增加,并具有量效和时效关系,LPS诱导GRP78、CIIOP,caspase-12和激活型caspase一3的表达上调;TG可引起肝细胞活力降低和细胞凋亡增加.并能加重LPS引起的肝细胞损伤;4一PBA明显抑制LPS引起的肝细胞凋亡增加。结论内质网应激参与介导了LPS引起的肝细胞凋亡.提示内质网应激是LPS诱导肝细胞损伤的重要发病途径。关键词:法医病理学

3、;内质网;脂多糖类;肝细胞;细胞凋亡;大鼠中图分类号:DF795.1文献标志码:Adoi:10.3969~.issn.1004-5619.2014.01.003文章编号:1004—5619(2014)01—0013—06EndoplasmicReticulumStressMediatesLipOpOlysaccharide—inducedApoptosisinRatHepatocyte1lYing-leiYANlun,WANGYan—sha,LIUYi-chang,GUZhen-yong(DepartmentofForensicMedicine,MedicalCollegeofNan

4、tongUniversity,Nantong226001,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheroleofendoplasmicreticulumstress(ERS)inlipopolysaccharide(LPS).inducedhepatocyteapoptosis.MethodsCellsoftherathepatocyte1ineBRLwerecultured.ThehepatocytesweretreatedwithLPS,ERSinducerthapsigargin(TG),andERSinhibitor4-phenylbut

5、yricacid(4.PBA).respectivelyorintheirdifferentcombination.Thecel1viabilitywasmeasuredbyMTTassay.Thecyto-nuclearmorphologicalchangesofapoptosiscellsweredetectedbythefluorescentdyeHoechst33258.TheapoptosisratewasassessedbyflowcytometrywithAnnexinV-FITC/PIdouble—staining.Ex-pressionsofGRP78asERSma

6、rkerprotein,CHOP,caspase一12andcleaved—caspase-3asERSrelatedproteinweredetectedbyWesternblotting.ResultsLPScouldcauseadecreaseincellviabilityandanincreaseinapoptosisrateinadose—andtime.dependentmanner.TheexpressionofGRP78,CHOP,cas-pase一12andcleaved—caspase.3proteinsweresignificantlyincreasedwith

7、LPStreatment.TG1edtoamarkeddecreaseincellviabilityandanincreaseinapoptosisrate,whichaggravatedthehepatocytein—iuryinducedbyLPS;whereas4.PBAalleviatedLPS—inducedapoptosis.ConclusionERSmediatesLPS-inducedhepatocyteinjuries,indicatin

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