胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢在脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用及机制

《胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢在脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用及机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。～签谚罕铈麟弓侈研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审

2、定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名夕壅牟目录IIIIIlUlIIIIIIUlIIIIY2397678中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文胱硫醚1，．裂解酶。硫化氢在脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用及机制前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6日{J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。47结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66中文摘要胱硫醚Y．裂解酶一硫化氢在脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用及机制摘要目的：探讨脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)诱导大鼠肝细胞胱硫醚丫-裂解酶．硫化氢(cystathionine],-lysae。hydrogensulfide，CSE—H2S)体系的规律性变化；查明CSE来源的H2S在LPS诱导的肝细胞凋亡中的作用，探讨内源性H2S参与肝细胞凋亡的相关机制。方法：大鼠肝细胞系BRL细胞培养，用CSEsiRNA应用于正常培养的B

5、RL细胞、LPS处理的BRL细胞。用RT．PCR、Westernblot检测CSE的基因和蛋白表达变化，用去蛋白法检测细胞内源性H2S生成量变化；生化方法检测细胞上清乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，LDH)活性、细胞丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量、细胞还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量以及MTT细胞生长抑制率变化；用流式细胞术、AnnexinV．FITC／PI双染法检测细胞凋亡率变化；荧光显微镜检测线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential，MMe)变化

6、；Westemblot检测细胞色素C(CytochromeC，CytC)、caspase．3激活体蛋(j(cleavedCaspase．3)表达变化。结果：1、大鼠肝细胞系BRL细胞在正常培养条件下存在着CSE基因、蛋白表达以及内源性H2S生成；CSEsiRNA引起BRL细胞CSE蛋白表达下调，内源性H2S生成明显减少；与Negativecontrol组比较，CSEsiRNA转染BRL细胞4-24h，BRL细胞上清LDH活性、细胞MDA含量、细胞GSH含量、MTT细胞增殖活力及细胞凋亡率均无明显影响。2、随着LPS作用时间延长(O～24h)及

7、LPS作用浓度(O．1～100pg／m1)升高，CSE基因、蛋白表达明显上调，内源性H2S生成呈时间依赖性和剂量依赖性明显增多；细胞凋亡比率上升，细胞MIVIP降低，胞浆CytC、caspase。3激活体蛋白表达上调；BRL细胞上清LDH活性增加，细胞MDA含量上升，细胞GSH含量在8h上调，12h、24h下降，MTT细胞生长抑制率在8h下调，12h、24h上升。3、CSEsiRNA与LPS共同作用BRL细胞，与LPS单独作用组相比，BRL细胞凋亡率在4h上升，8h无显著性差异，12h、24h明显下降；细胞MMP在4h下降，8h无显著性差异，

8、12h、24h明显上升；胞浆CytC、caspase．3激活体蛋白表达在4h上升，8h无显著性差异，12h、24h明显下降。结论：1、大鼠肝细胞系BRL细胞在正常培