硫化氢在脂多糖所致老年大鼠急性肺损伤中的作用

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1、硫化氢在脂多糖所致老年大鼠急性肺损伤中的作用：周晓红黄新莉曹华张雪静凌亦凌【摘要】目的探讨硫化氢（H2S）在脂多糖（LPS）所致老年大鼠急性肺损伤（ALI）中的作用机制。方法64只SD老年大鼠随机分为对照组、LPS组、NaHS+LPS组、炔丙基甘氨酸（PPG）+LPS组，每组16只。LPS组、NaHS+LPS组、PPG+LPS组经气管内滴注LPS200μg/只，制备大鼠ALI模型；对照组经气管内滴注无菌生理盐水200μl/只。NaHS+LPS组制模前10min腹腔注射NaHS28μmol/kg，PPG+LPS组制模前10min腹腔注射PPG

2、45mg/kg。给药后4h或8h处死动物，测定肺系数；光镜观察肺组织形态学改变；化学法检测血浆H2S、NO和CO含量、肺组织丙二醛（MDA）含量、胱硫醚γ裂解酶（CSE）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血红素加氧酶1（HO1）活性；采用免疫组织化学法检测肺组织iNOS、HO1蛋白表达及吸光度值。结果气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变；肺系数和肺组织MDA含量增加；血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降；肺组织iNOS活性和iNOS蛋白表达增强，血浆NO含量增加；肺组织HO活性和HO1蛋白表达增强，血浆CO含量增加。预先

3、给予NaHS可显著减轻LPS所致肺组织损伤，肺系数和肺组织MDA含量下降；血浆H2S含量和肺组织CSE活性升高；肺组织iNOS活性和iNOS蛋白表达减弱，血浆NO含量减少；肺组织HO活性和HO1蛋白表达增强，血浆CO含量增加（均P＜0.05）。而预先给予PPG可加重LPS所致肺损伤，使血浆NO含量、肺组织iNOS活性和iNOS蛋白表达进一步增加（均P＜0.05），但对血浆CO含量、HO活性和HO1蛋白表达无明显影响。结论H2S/CSE体系的下调在LPS所致老年大鼠ALI的发病学中有一定作用，而外源性给予一定量的NaHS对肺组织具有保护作

4、用，其可能与抗氧化效应和下调NO/iNOS体系、上调CO/HO1体系有一定关系。【关键词】硫化氢；老年大鼠；急性肺损伤；一氧化氮；一氧化碳；一氧化氮合酶；血红素加氧酶急性肺损伤（acutelunginjury，ALI）主要病变特点是急性弥漫性肺泡和肺血管损伤，最终可发展至急性呼吸窘迫综合征，其发病机制尚未完全阐明。内源性气体信号分子NO和CO在ALI中的作用已得到证实〔1～3〕，研究表明H2S可能是继NO和CO之后的第3种气体信号分子〔4〕，参与神经和血管功能调节等多种生理和病理过程〔5～7〕。但H2S是否参与ALI的发病尚不清楚。研究发

5、现，H2S和NO共同参与了LPS所致的肺动脉反应性异常〔8〕，推测H2S和NO、CO之间可能也存在某种联系。本研究着重观察ALI时H2S及其生成关键酶胱硫醚γ裂解酶（cystathionineγlyase，CSE）的变化；并应用H2S供体NaHS和CSE抑制剂炔丙基甘氨酸（propargylglycine，PPG）观察H2S对ALI时肺组织损伤指标和NO/诱导型NO合酶（induciblenitricoxidesynthase，iNOS）、CO/血红素加氧酶1（hemeoxygenase1，HO1）体系变化的影响，探讨H2S在

6、LPS所致ALI中的作用及可能的机制。　　1材料与方法　　1.1动物　　清洁级健康雄性SD大鼠64只，20月龄，体重350～400g（购于河北医科大学实验动物中心），自由摄食、饮水，室温18℃～24℃，相对湿度40%～70%，每日12h光照维持，昼夜循环。　　1.2方法　　1.2.1试剂　　大肠杆菌脂多糖（LPSE.coliO111:B4）、NaHS、炔丙基甘氨酸(PPG)、L半胱氨酸、5′磷酸吡哆醛、N，N二甲基对苯二胺硫酸盐、血红蛋白、血红素、NADP、6磷酸葡萄糖和6磷酸葡萄糖脱氢酶均购自Sigma公司，抗iNOS多克隆抗

7、体、抗HO1多克隆抗体购自博士德公司，SP免疫组化检测试剂盒购自北京中杉生物技术公司，NO与CO、iNOS与HO、丙二醛（MDA）、考马斯亮蓝检测试剂盒购自南京建成生物公司。　　1.2.2模型制备　　SD大鼠适应性喂养1in腹腔注射NaHS（28μmol/kg，溶于0.5ml生理盐水）；PPG+LPS组滴注LPS前10min腹腔注射PPG（45mg/kg，溶于0.5ml生理盐水）。　　1.2.3检测指标　　滴注药物后4h或8h颈总动脉放血处死动物。取血浆采用去蛋白的分光光度法〔5〕根据H2S标准曲线计算上清液中H2S的含量；采用硝酸还原酶

8、法间接测定血浆NO含量；参照Chalmber等〔9〕的双波长分光光度法，以血浆中HbCO的百分比含量(%)代表CO含量；取全肺自气管分叉以上5、6软骨环间剪断气管，用滤纸吸干肺表