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《pscgpd1启动子融合gus基因在酿酒酵母中的瞬时表达_王俊杰》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第27卷第5期食品与生物技术学报Vol.27No.52008年9月JournalofFoodScienceandBiotechnologySep.2008文章编号:1673-1689(2008)05-0027-06PScgpd1启动子融合GUS基因在酿酒酵母中的瞬时表达1,2*1,21,21,21,2王俊杰,饶志明,沈微,方慧英,诸葛健(1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122;2.江南大学生物工程学院,江苏无锡214122)摘要:利用PCR技术从酿酒酵母基因组克隆得到甘油代谢关键酶基因gpd1启动子,并成功构建真核生物穿梭表达载体pYX212-z
2、oecin-PScgpd1-GUS,并将其电击转入酿酒酵母中。将构建成功的酿酒酵母Saccharomycescerevisiae基因工程菌分别在012,015,110mol/LNaCl的盐胁迫下培养,首次通过GUS组织化学染色法和荧光法测定GUS报告基因的瞬时表达酶活检测gpd1启动子的酶活表达。研究发现,酵母甘油代谢关键酶基因gpd1启动子在不同渗透压下的表达有明显的差异。证实了gpd1启动子是受渗透压调节的,属于诱导型启动子,这可能与渗透压胁迫下的甘油代谢密切关联,相关研究未见报道。关键词:甘油代谢;gpd1启动子;B-葡糖苷酸酶中图分类号:Q939.97文献标识码
3、:AAnalysisofPromotergpd1oftheKeyGeneofGlycerolMetabolicinSaccharomycescerevisiaatDifferentOsmoticStress1,2*1,21,21,21,2WANGJun-jie,RAOZh-iming,SHENWei,FANGHu-iying,ZHUGEJian(1.KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,JiangnanUniversity,Wuxi214122,China;2.SchoolofBiotech
4、nology,JiangnanUniversity,Wuxi214122,China)Abstract:AshuttlevectorpYX212-zeocin-PScgpd1-GUShadbeenconstructedandtransformedintoSaccharomycescerevisiaebyelectroporation.Thetransformantswasculturedinmediumwith012,015and110mol/LNaClsupplement,respectively.Theenzymeactivityofpromotergpd1wasd
5、eterminedbytransienthistochemicalanalysisofGUSgeneatdifferentosmoticpressure.Theresultshowedthattheexpressionofpromotergpd1inS.cerevisiaeatdifferentosmoticpressurewereprominentlydifferent.Itwasconcludedthatthepromotergpd1wasaninduciblepromoter,regulatedbyosmoticpressure.Keywords:glycerol
6、metabolic;promotergpd1;GUS收稿日期:2007-07-25.基金项目:国家自然科学基金项目(30570142,20676053);国家863计划项目(2006AA020103);江苏省青年科技创新人才基金项目(BK2006504);长江学者和创新团队发展计划项目(IRT0532).作者简介:王俊杰(1983-),男,湖北武汉人,微生物学硕士研究生.*通讯作者:饶志明(1975-),男,江西临川人,农学博士,教授,硕士生导师.主要从事工业微生物育种及分子生物学改造方面的研究.Email:raozm@yahoo.com.cn28食品与生物技术学报第2
7、7卷甘油(glycerol)是甘油三酸酯分子的骨架成分;zeocin,p3300-zeocin由作者所在实验室保藏。它具有相对分子量小、容易溶解,在生理pH值范围11112工具酶和试剂限制性内切酶HindIII、内不带净电荷,能被细胞膜保持住,对生物细胞无BamHI、BglII、SalI,T4DNA连接酶,TaqDNA聚任何毒副作用等特点,因此被认为是一种极其理想合酶等购自TaKaRa公司;质粒提取试剂盒,小型的耐高渗透压介质。在真核生物中,存在于胞浆中DNA片断回收试剂盒购自博大泰克公司;氨苄西+的3-磷酸甘油脱氢酶,以NAD为辅酶,催
