生物分子工程专业毕业论文 [精品论文] 乳酸克鲁维酵母cu，zn-sod基因在酿酒酵母中的表达

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1、生物分子工程专业毕业论文[精品论文]乳酸克鲁维酵母Cu，Zn-SOD基因在酿酒酵母中的表达关键词：酿酒酵母克隆表达抗胁迫百草枯基因表达表达载体氧化胁迫摘要：超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase；EC1.15.1.1；SOD)广泛存在于生物体内。按金属辅基的不同可分为Cu，Zn-SOD，Mn-SOD与Fe-SOD。Cu，Zn-SOD主要存在于真核生物的细胞质和过氧化物酶中，同时它也存在于植物的叶绿体中。在哺乳动物体内存在两种类型的Cu，Zn-SOD，一种是细胞内存在形式，叫细胞内Cu，Zn-SOD(简称Cu，Zn-SOD)，另一种是细胞外存在形式，叫细胞外Cu，Zn-S

2、OD(简称EC-SOD)。SOD是机体内唯一以超氧阴离子自由基(O2-·)为底物的酶，它能专一地催化O2-·的歧化反应，生成过氧化氢和氧气，在防止氧化胁迫方面发挥重要作用，能有效的抵御氧自由基和其他氧化物，对机体防御氧化损伤起着十分重要的作用。本工作主要对SOD在抵抗外界胁迫下功能进行研究。通过PCR扩增技术从乳酸克鲁维酵母基因组中得到了465bp的Cu，Zn-SOD结构基因，从pUCm-T载体上获得了1214bp带有PGK1启动子和AT终止子的GFP基因，并把它们构建到酿酒酵母表达载体YEplac195-PSGA中。通过菌落PCR验证和荧光检测证明了所构建载体能在酿酒酵母中成功表达；

3、通过百草枯压力筛选和邻苯三酚酶活测定法证明了乳酸克鲁维酵母SOD基因已经在酿酒酵母中表达并且提高了酿酒酵母在氧化胁迫方面的耐受力；也证明提高SOD的表达量只能在一定范围内增加菌体在氧胁迫方面的耐受力。通过SphI/EcoRI双酶切YEplac195-PSGA得到了PGK1-SOD-GFP-AT基因片段并插入YCplac33载体，得到了YCplac33-PSGA载体；通过荧光观察和热击实验得出含有YEplac195-PSGA载体的酿酒酵母SOD的表达量显著高于含有YCplac33-PSGA载体的酵母菌，抗热击能力也强于含有YCplac33-PSGA载体的酵母，从而证实SOD在防止氧化胁迫

4、方面发挥了重要作用。正文内容超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase；EC1.15.1.1；SOD)广泛存在于生物体内。按金属辅基的不同可分为Cu，Zn-SOD，Mn-SOD与Fe-SOD。Cu，Zn-SOD主要存在于真核生物的细胞质和过氧化物酶中，同时它也存在于植物的叶绿体中。在哺乳动物体内存在两种类型的Cu，Zn-SOD，一种是细胞内存在形式，叫细胞内Cu，Zn-SOD(简称Cu，Zn-SOD)，另一种是细胞外存在形式，叫细胞外Cu，Zn-SOD(简称EC-SOD)。SOD是机体内唯一以超氧阴离子自由基(O2-·)为底物的酶，它能专一地催化O2-·的歧化反应，生成过氧

5、化氢和氧气，在防止氧化胁迫方面发挥重要作用，能有效的抵御氧自由基和其他氧化物，对机体防御氧化损伤起着十分重要的作用。本工作主要对SOD在抵抗外界胁迫下功能进行研究。通过PCR扩增技术从乳酸克鲁维酵母基因组中得到了465bp的Cu，Zn-SOD结构基因，从pUCm-T载体上获得了1214bp带有PGK1启动子和AT终止子的GFP基因，并把它们构建到酿酒酵母表达载体YEplac195-PSGA中。通过菌落PCR验证和荧光检测证明了所构建载体能在酿酒酵母中成功表达；通过百草枯压力筛选和邻苯三酚酶活测定法证明了乳酸克鲁维酵母SOD基因已经在酿酒酵母中表达并且提高了酿酒酵母在氧化胁迫方面的耐受力

6、；也证明提高SOD的表达量只能在一定范围内增加菌体在氧胁迫方面的耐受力。通过SphI/EcoRI双酶切YEplac195-PSGA得到了PGK1-SOD-GFP-AT基因片段并插入YCplac33载体，得到了YCplac33-PSGA载体；通过荧光观察和热击实验得出含有YEplac195-PSGA载体的酿酒酵母SOD的表达量显著高于含有YCplac33-PSGA载体的酵母菌，抗热击能力也强于含有YCplac33-PSGA载体的酵母，从而证实SOD在防止氧化胁迫方面发挥了重要作用。超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase；EC1.15.1.1；SOD)广泛存在于生物体内。按

7、金属辅基的不同可分为Cu，Zn-SOD，Mn-SOD与Fe-SOD。Cu，Zn-SOD主要存在于真核生物的细胞质和过氧化物酶中，同时它也存在于植物的叶绿体中。在哺乳动物体内存在两种类型的Cu，Zn-SOD，一种是细胞内存在形式，叫细胞内Cu，Zn-SOD(简称Cu，Zn-SOD)，另一种是细胞外存在形式，叫细胞外Cu，Zn-SOD(简称EC-SOD)。SOD是机体内唯一以超氧阴离子自由基(O2-·)为底物的酶，它能专一地催化O2-·的歧化反应，