酿酒酵母培养基配方和诱导表达方法

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1、第一部分酿酒酵母培养基和培养平板配方所有的液体培养基需用磷酸缓冲液配制：Na2HPO4-7H2O,10.19g/L,NaH2PO4-H2O8.56g/L.称量好所需组分，先把氨基酸、氮源等添加到水中，再添加糖最后添加10X的磷酸缓冲液。液体培养基的PH需在6.25左右。液体选择培养基和丰富培养基可以选择过滤除菌，但是琼脂平板培养基必须高压灭菌丰富非选择培养基2x(YEPDor)YPD=YeastExtractPeptoneDextrose20g酵母粉yeastextract(OXOIDLP0021)40g蛋白胨peptone(OXOIDLP0042)40g葡萄糖

2、dextrose**（国药14434-43-7）把除葡糖糖之外的所有组分加入500ml水中溶解，定容至900ml，高压灭菌配置20%的葡萄糖过滤除菌，添加100ml。室温保存1-2个月。**也可以所有组分一起灭菌，但是可能会发生焦化作用，然而焦化作用不会引起任何问题。生长选择合成培养基（SelectiveGrowthSyntheticMedia）2x(SD–CAA)1）用于EBY100菌株配套pYD系列载体，或者二配体酵母配套pPNL20和pPNL30载体10g/L酪蛋白水解物casaminoacids(-ade,-ura,-trp)（库存货号：FlukaA24

3、27-250G）40g/L葡萄糖dextrose（国药14434-43-7）14g/LYNBYeastNitrogenBasewithammoniumsulfatew/outaminoacids（SIGMAY0626）5.4g/LNa2HPO4（国药10039-32-4）7.4g/LNaH2PO4（国药14431-43-7）442）用于YVH10withpPNL30系列载体10g/L酪蛋白水解物（casaminoacids(-ade,-ura,-trp)40g/L葡萄糖dextrose14g/LYNB（YeastNitrogenBasewithammoniums

4、ulfatew/outaminoacids）40mg/L色氨酸（tryptophan）5.4g/LNa2HPO47.4g/LNaH2PO43)用于JARwithpPNL20系列载体10g/L酪蛋白水解物（casaminoacids(-ade,-ura,-trp)(BDBacto#223050)40g/L葡萄糖dextrose14g/LYNB（YeastNitrogenBasewithammoniumsulfatew/outaminoacids）(BDDifco233520)20mg/L尿嘧啶Uracil5.4g/LNa2HPO47.4g/LNaH2PO4Sele

5、ctivescFv(orFaborligand)InductionMedia抗体scFv(orFabor配体)的选择诱导培养基2x(SG-CAA)10g/L酪蛋白水解物casaminoacids(-ade,-ura,-trp)(BDBacto#223050)2g/L半乳糖galactose2g/L棉子糖raffinose0.1g/L葡萄糖glucose14g/LYNBYeastNitrogenBasewithammoniumsulfatew/outaminoacids(BDDifco233520)5.4g/LNa2HPO47.4g/LNaH2PO4YEPGRor

6、YPGR=YeastExtractPeptoneGalactose/Raffinose10g酵母粉yeastextract20g蛋白胨peptone2%半乳糖galactose2%葡萄糖raffinose14g/LYNBYeastNitrogenBasewithammoniumsulfatew/outaminoacids(BDDifco233520)5.4g/LNa2HPO47.4g/LNaH2PO4尿嘧啶和色氨酸母液的配置色氨酸配制成4mg/ml的100X的母液，过滤除菌尿嘧啶配制成2mg/ml的100X的母液，过滤除菌酵母培养基的配置和选择培养基的种类：应用

7、最广泛的酿酒酵母培养基是YPD培养基（酵母粉、蛋白胨、葡萄糖），单克隆在YPD上的生长通常受尿嘧啶、精氨酸和色氨酸的限制。额外的添加这些组分克隆的形成将会加快加大。合成培养基由盐（基本氮源和硫酸胺）碳源（比如葡萄糖）和其他组分（核苷酸和氨基酸）组成。合成培养基可以用dropin”或者“dropout”的策略筛选特定原养型菌株“Dropout”这种培养基是成分确定的营养丰富的培养基，其中添加很多氨基酸和核苷酸来支持菌株的生长。菌株可以在这种培养基中快速生长，接近在YPD平板上的生长速度，“Dropout”培养基通常称为完全合成培养基，简称SC，缺失某一种氨基酸或者

8、核苷酸可以选择特定的原养