DNMT3a表达上调与A549细胞对顺铂耐受关系的实验探究-论文.pdf

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1、中国细胞生物学学报ChineseJournalofCellBiology2013，35(7)：991-996http：／／www．cjcb．orgDOI：10．11844／cjcb．2013．07．0072DNMT3a表达上调与A549~$胞对顺铂耐受关系的实验探究吴艳凤侯玉磊薛成军李德涛郑倩陈辉(重庆医科大学附属第一医院检验科，重庆400016)摘要基因甲基化状态改变是肿瘤获得性耐药产生的重要途径之一。DNMTs是基因甲基化的重要调节因子。为了寻找预测肺腺癌A549~胞对顺铂敏感性的生物标志，该研究~?ZA549

2、细胞和对顺铂耐受的同源A549细胞(A549．DDP)~研究对象，利用质粒转染技术上调A549细胞DMa表达，通过RT_PcR检测转染前后DNMT3a在mRNA水平的表达情况。在不同浓度顺铂作用下，通过MTT法、克隆形成实验检测转染前后细胞增殖率并计算Ic。和计数细胞克隆形成数。在相同顺铂浓度作用下，流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡分数的改变。结果显示：顺铂作用24h后，转染DNMT3a表达质粒的A549细胞对顺铂IC50明显高于A549~胞f(9．19~0．91)pmol／LVS(4．96~0．58)p,mol／L

3、，P=O．000]，转染后的细胞凋亡率明显低于未转染细胞【(1．33~0-38)％vs(5．22~0．67)％，P=-0．039]；不同浓度顺铂连续作用5d后，转染DNMT3a表达质粒的A549细胞形成的克隆数均明显高于A549细胞组。结果提示，DNMT3a表达上调是肺腺癌A549~胞对顺铂获得性耐受的重要原因之一。检测肺癌患者血清DⅣ^口水平作为预测肺癌患者对顺铂敏感性的生物标志值得进一步研究。关键词DNMT3a；非小细胞肺癌；A549细胞株；顺铂；化疗耐受TheUp—regulationExpressionof

4、DNMT3aResensitizesA549CelltoCisplatinWuYanfeng，HouYule~，XueChengjun，LiDetao，ZhengQian，ChenHui(ClinicalLaboratories，theFirstAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing40001~China)AbstractThechangeofgenemethylationstatusiSamaincauseforacquiredchemore

5、sistanceofcancer．DNMTsplaysanindispensableroleinmethylationregulations．InordertofindabiomarkerpredictingchemosensitivityofA549celltocisplatin，humanlungadenocarcinomaA549cellswerechosenandtransfectedwithaDNMT3aplasmidtoenhancetheexpressionofDNMT3a．Semi—quantita

6、tiveRT-PCRwasperformedtoconfirmtheexpressionofDNMT3amRNAbeforeandafterplasmidtransfect．Exposingtodiferentconcentrationsofcispaltin，MTTassayswereusedtoevaluatecellviabilityandcalculatetheIC5ovaluetocisplatinbeforeandafterplasmidtransfectrespectively；cloneformat

7、ionassayweredetectedtoevaluatethecloneformingabilitybeforeandaftercelltransfect．Exposingtothesameconcentrationofcisplatin，flowcytometricanalysiswasusedtoassessapoptosisratebeforeandafterplasmidtransfect．Theresultsindicated：exposingtocisplatin24h，ICsovaluetocis

8、platinincreasedgreatlyinA549cellwithexogenousexpressionofDNMT3athanthatinA549cell[(9．19~0．91)ktmol／Lvs(4．96~0．58)收稿日期：2013．03—21接受日期：2013．04．28重庆市自然科学基金(批准号：cstc2012jjA10105)、重庆市卫生