[精品]植物愈伤组织培养.doc

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1、植物愈伤组织培养:生命科学技术学院:08级生物工程:臧忠嬪:邢宏塑:20084082028植物愈伤组织培养摘要：将一个植物细胞、一块植物组织或一个植物器官的细胞，通过去分化形成愈伤组织，并在体外培养使之再分化成植株的技术称之为植物愈伤组织培养。而植物愈伤组织的培养离不开植物组织培养。植物组织培养是在含有营养物质及植物生长物质的培养液小，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术。本次试验以胡萝卜的形成层为材料，培养其愈伤组织。关键词：胡萝卜，愈伤组织，植物组织培养，脱分化实验H的1掌握植

2、物培养的相关理论知识2掌握组织培养的操作方法3了解不同激素及其比例对愈伤纽织的再分化作用。试剂及仪器（一）仪器设备超净工作台、高压灭菌锅、微波炉、电子天平、移液器（l-5ml）.酸度计、手术刀、手术剪、称量纸、皮筋、封口膜、三角烧瓶（500ml、100ml）、量筒、烧杯（1000ml）、试剂瓶（1000ml、100ml）、长银子、记号笔、培养皿、酒精灯、打孔器（二）试剂75%酒精、次氯酸钠（或H2O2）、植物生长激素、蔗糖、脂粉、HC1、NaOH、KH2PO4、烟酸、盐酸■硫胺素（VB1）、盐酸■毗哆醇

3、（VB6）、肌醇、甘氨酸（三）试验材料新鲜的胡萝卜实验步骤（-）培养基配制1.培养基的选择植物组织培养屮应用的培养基，一般由无机营养物、碳源、维生索、生长调节剂和有机附加物等五类物质组成。无机营养物包括大量元索和微量元索。大量元索：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Na.Mg等，微量元索：Mn、Zn、Cu、B、Mo>Fe等。碳源一般为蔗糖。维生索中只有硫胺索是必需的，而烟酸、维生素B6和肌醇对生长之起促进作用。常用的生长调节剂有IAA3卅朵乙酸）、IBA（酬味・3■丁酸）、NAA（蔡乙酸）、NOA（蔡氧

4、乙酸）、P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2,4-D（二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（三氯苯氧乙酸）；BAP（节氨基嗥吟）、6-BA（节基腺嚟吟）、2-Zi（异戊烯氨基瞟吟）、KT（激动索）等。有机附加物是指廿氨酸、水解酪蛋口、椰子乳等，可促进分化，但如培养基配方适当，则大多数组织是不需要的。培养基的种类、成份在接影响到培养材料的生长发育，故应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。培养基种类繁多，最基木、最常用的培养基为MS培养基。2.培养基的配制①先配制MS培养基贮液，②再将贮液与其他成分按比例混合。

5、③此外还需加入适量的蔗糖作为碳源，起支持作用的琼脂粉，适量的生长调节剂等。④将上述培养基加热溶解后，加蒸镭水使培养基达到终体积。⑤再用0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHC1调节培养基的pH值至最适。⑥分装至三角烧瓶，封口膜封口，等待灭菌后使用。3.儿种诱导愈伤组织的培养基胡萝卜MS+0.5mg/L6BA+0.5mg/LNAA玫瑰叶盘，芽MS+().5mg/L6BA4-().5mg/LNAA烟草叶盘、叶柄MS+0.1mg/L6BA+0.5mg/LNAApH5.8,蔗糖30%,琼脂粉6.5g/Lo

6、(二)灭菌1.培养基及器具灭菌培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为121°C,所需时间应随要灭菌的液体的容积变化而变化灭菌结束后待温度下降到5()°C以下，才能取出已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌，包括：培养川I.、解剖刀、剪子、滤纸、蹑子、打孔器等。2•工作环境灭菌接种前1h打开超净丁作台和棚面的紫外灯照射40mino杀菌结束后，先关掉棚面的紫外灯，再打开风机，最后关掉超净工作台上的紫外灯。在接种后休息时，要先打开台面的紫外灯，再关风机，最后打开棚面

7、紫外灯。不能将风机与台面上的紫外灯同时关闭或先关闭风机再开紫外灯。3.植物材料的灭菌植株各部分的表面携带着各种微生物，他们是植物组培的污染源，所以在接种培养前必须进行彻底的表面消毒；组织内部侵染的真菌或细菌很难消除，这些组织一般淘汰不用。消毒前需用流水清洗植物材料表面污垢，再用无菌洁净滤纸吸干水分。植物材料的灭菌需在超净T作台内进行，可选择不同的灭菌剂进行•植物组织表面消毒(见表3)。同时注意,表面消毒剂对植物组织也是有毒的。因此，应当选择消毒剂的浓度和时间，尽量减少组织的死亡。灭菌后，需用无菌水反复冲

8、洗，彻底洗去表面消毒剂。如：胡萝卜储藏根消毒：将胡萝卜用洗涤灵淸洗，擦干，切段。进超净工作台后，先用75%洒精擦洗切段,擦干后，在2%次氯酸钠中浸泡5秒钟,用无菌水冲洗1()次,无菌滤纸吸干，用灭过菌的打孔器取材。准备工作就绪后，可以进行接种。接种1.进台工作人员进入接种室前，需要洗净手和手腕。进入超净工作台内需用75%酒精纱布擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台。2.接种(1)剪、银消毒：接种前剪、银应插入75%酒精瓶屮，取出后置于酒精