植物愈伤组织培养及其应用-本科实验报告

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1、本科学生实验报告学号124120439姓名牟兴玲学院生命科学学院专业、班级12级生物技术实验课程名称植物愈伤组织培养及其应用指导教师及职称郝大海开课时间2014至＿2015学年上学期填报时间2014年12月16日云南师范大学教务处编印实验名称：植物愈伤组织培养及其应用实验时间：2014年9月至2014年12月小组合作：是一、实验预习1‘实验目的（1）、掌握培养基母液配制方法（2）、掌握培养基配制方法（3）、熟悉无菌材料继代、繁殖操作（4）、熟悉愈伤组织诱导、再分化技术（5）、熟悉试管苗移栽、定植技术2、实验设备及材料（1）、仪器设备：高压蒸汽

2、灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100ml三角烧瓶（12个/组）、150ml三角瓶、试剂瓶、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。（2）、试剂：95%酒精，1NNaOH，1NHCl，硝酸铵，硝酸钾，氯化钙，磷酸二氢钾，硫酸镁，硫酸锰，硫酸锌，氯化钴，硫酸铜，钼酸钠，碘化钾，硼酸，Na2EDTA，硫酸亚铁，盐酸，盐酸吡哆素（V

3、B6），盐酸硫胺素（VB1），肌醇，甘氨酸，蒸馏水。（3）MS继代培养基的配制及灭菌仪器：pH试纸、电磁搅拌器、电炉用具：高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1NNaOH，1NHCl3、实验原理及实验流程或装置示意图：（一）植物组织培养是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。母液配制：在植物组织培养工作中，通

4、常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。（二）培养基成分：水、无机盐、有机物、植物激素、培养体的支持材料、其他辅助性物质（三）灭菌（1）有菌的区域是：凡是暴露在空气中的物体，接触自然水源的物体，至少它的表面都是有菌的。因此，无菌室未处理的地方、超净台表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表，呼出的气体、培养容器无论洗得多干净等等都是有菌的。（2）菌包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。（3）无菌的区

5、域：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。（4）灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的微生物全部杀死。（5）消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。显然经过消毒，许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死，即由于在消毒后的环境里和物品上还有活着的微生物，所以通过严格灭菌的操作空间(接种室、超

6、净台、等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。（6）在这样的条件下进行的操作，就叫做无菌操作。（7）无菌操作①、用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌◆用前干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h◆用前湿热灭菌：121℃,20-30min◆接种前用酒精棉球擦试，浸入75%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。②、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌◆干热灭菌：烘箱加热到160-180℃,1.5-2.0h◆湿热灭菌：121℃,20-40min◆接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。③、空间采用紫外线和熏蒸灭菌◆紫外灯照射(接

7、种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20-30min。◆臭氧灭菌机：1-2h◆熏蒸灭菌：5-8ml/m3甲醛+5g/m3高锰酸钾；冰醋酸；1-3%高锰酸钾或3%来苏儿。◆接种台喷雾消毒：75%酒精。④、实验服、口罩、滤纸灭菌◆湿热灭菌：121℃,20-30min◆紫外线灭菌。◆实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。⑤、物体表面用药剂喷雾/擦拭灭菌◆灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌◆范围：桌面、墙面、双手、材料表面◆消毒剂：70%酒精；1-2%来苏水；0.25-1%新洁尔灭；洗衣粉；吐温-80（8）常用的灭菌方法物理方法如干热(烘烧和灼

8、烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸