植物愈伤组织培养.doc

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1、植物愈伤组织培养:牛命科学技术学院:08级牛物工程:臧忠嬪:邢宏璽:20084082028植物愈伤组织增殖和分化培养摘要：愈伤组织是指外植体屮的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分牛细胞，继而由其衍牛的细胞分化成的薄壁组织。在植物的组织培养屮，从-•块外植体形成典型的愈伤组织，人致要经历三个吋期：启动期、分裂期和形成期。启动期指细胞准备进行分裂的时期。分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增牛子细胞的过程。分裂期愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。分化期是指在分裂的末期，细

2、胞内开始出现一系列形态和牛理上的变化，从而使愈伤组织内产牛不同形态和功能的细胞。愈伤组织的牛长与微牛物相同，均呈“S”型，分为延迟牛长期、指数牛长期和静止牛长期。在延迟期内，刚接种的的愈伤组织尚未完全适应心的环境，不能很好地吸收营养物质，牛长缓慢；在指数牛长期，牛长加速，培养物鲜重急剧增加；培养后期，即静止期，培养基屮养分几乎消耗尽，不能提供培养物增殖所需的营养物质，牛长几乎停滞。愈伤组织分化主要有两条途径，即器官发牛途径和体细胞胚胎途径。前者乂分为直接发牛和间接发牛两种。直接发牛方式是指器官到器官，比如由茎

3、尖到不定芽等，间接发牛途径是指由外植体脱分化后形成愈伤组织，然后再有愈伤组织喜栄发牛再分化形成组织和器官。愈伤组织如何分化受多种因索的影响，如植物物种、站种、培养基屮化学成分及其使用量、酸碱度、牛长素和细胞分裂素的种类及其配比、培养吋的温度、光照等等。牛长素和细胞分裂素的配比在外植体脱分化和培养体再分化过程屮使用。由于培养H的的不同，外植体取材物种不同、取材部位不同，其内源激索的的含量与比例不同，培养时培养基屮需要添加的外源激索的种类及其配比亦不同。细胞分裂素比例高时，有利于芽的分化，反之，牛长素高时，促进根

4、的分化。关键词:愈伤组织，增殖，分化1•实验目的1.1学习愈伤组织增殖的方法1.2了解愈伤组织分化的原理1.3学习诱导愈伤组织分化的方法2•实验材料、试剂及设备2.1仪器设备超净工作台、银子、酒精灯、棉球、无菌水2.2试剂培养基母液、CH（水解酪蛋白）、蔗糖、琼脂，2,4-D,6-BA,NAA2.3实验材料新鲜的胡萝卜、菊花花瓣3•实验步骤3.1培养基的配制3.1.1愈伤组织的增殖培养基配方：胡萝卜：MS基木培养基+2,4・D2mgL+0、2mg/l6-BA+CH200mg/l+3%蔗糖+0/8%琼脂pH5

5、.8母液吸取量（ml）=配制培养基的数量（ml）/母液扩大数量生长调节剂吸取量（ml）二培养基要求的含量/母液每ml的含量3.1.2菊花花瓣生芽培养基配方：分化培养基（先生芽）;MS基木培养基+2mg/l6-BA+0.2mg/lNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH5.8母液吸取量（ml）=配制培养基的数量（ml）/母液扩大数量生长调节剂吸取量（ml）二培养基要求的含量/母液每ml的含量3.2灭菌1•培养基及器具灭菌培养基、无菌水需要在高压灭菌锅屮灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为121C,所需时间应随要

6、灭菌的液体的容积变化而变化灭菌结束后待温度下降到50°C以下，才能取出已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌。2.植物材料的灭菌植株各部分的表面携带着各种微生物，他们是植物组培的污染源，所以在接种培养前必须述行彻底的表面消毒；组织内部侵染的真菌或细菌很难消除，这些组织一般淘汰不用。消毒前需用流水淸洗植物材料表面污垢，再用无菌洁净滤纸吸干水分。植物材料的灭菌需在超净工作台内进行，可选择不同的灭菌剂进行植物组织表面消毒。同时注意，表面消毒剂对植物组织也是有毒的。因此，应当选择消毒剂的浓度和时间，尽量减少组

7、织的死亡。灭菌后，需用无菌水反复冲洗，彻底洗去表面消毒剂。如：胡萝卜消毒：将胡萝卜用洗涤灵清洗，擦干，切段。进超净T作台后，先用75%酒精擦洗切段，擦干后，在2%次氯酸钠中浸泡5秒钟，用无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干，用灭过菌的打孔器取材。准备工作就绪后，可以进行接种。3.3按照无菌操作，小心挑取愈伤组织3・5,放置到分化培养基或增殖培养基小。注意标明接种口期和外植体名称。3.4放置培养室培养，2周后统计愈伤组织分化情况，并计算分化率。分化率（％）=（牛芽愈伤组织块数/接种愈伤组织总块数）乘100%4•实验结

8、果在接入分化培养基培养两周后，大部分愈伤组织己分化。经计算，分化率为87%o参考文献1•细胞工程实验教程王消主编2.细胞工程（第二版）安利国主编