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1、第29卷第6期分析科学学报2013年12月Vo1.29No.6joURNALOFANALYTICALSCIENCEDec.2013文章编号;1006—6144(2013)06—0785—06稀土离子介导下呋喃香豆素类药物与溶菌酶的作用机理宋志英,韩冬,王娟,仝月菊,付正卿,张爱平(山西医科大学药学院,山西太原030001)摘要:在模拟人体生理条件下,采用荧光光谱法和同步荧光光谱法研究稀土离子La什、Gd抖、Yb。和Lu。介导下,补骨脂素、异补骨脂素、5一甲氧基补骨脂素和8一甲基补骨脂素四种呋喃香豆素类药物与溶茵酶(LYSO)的作用机理。荧光光谱结果表明,稀土离
2、子的存在使得四种呋喃香豆素类药物对LYSO的荧光猝灭增强,其猝灭机理主要为静态猝灭。四种呋喃香豆素类药物与LYS0均形成1:1复合物,其作用力主要为氢键和范德华力。不同的稀土离子对四种呋喃香豆素类药物与LYSO相互作用的介导能力不同,其顺序为:La件>Gd什>Yb计>Lu”。同步荧光光谱结果显示稀土离子介导下,四种呋喃香豆素类药物与LYSO相互作用后,LYS0的构象均发生改变。关键词:稀土离子;呋喃香豆素类药物;溶茵酶;荧光光谱法;反应机理中图分类号:0657.39文献标志码:A溶菌酶(Lysozyme,LYSO)是一种广泛存在于生物体内的小分子碱性蛋白,同时
3、也是药物发挥药效的重要载体和靶分子,因此常作为研究药物与蛋白相互作用的模型蛋白[1]。补骨脂素(Psoralen,PSO)、异补骨脂素(Isopsoralen,ISO)、5一甲氧基补骨脂素(5-Methoxypsoralen,5一MOP)和8一甲氧基补骨脂素(8一Methoxypsoralen,8-MOP)均属于呋喃香豆素类药物,它们具有广泛的药理活性,如止咳、抗炎、抗风湿、抗凝血、抗肿瘤等作用]。有关中药小分子和蛋白相互作用的研究,前期工作主要集中在中药小分子一蛋白的二元体系。及金属离子]一中药小分子一蛋白的三元体系。近年来,随着稀土越来越广泛地应用于医学等
4、研究领域,稀土离子(Re。)通过各种途径进入人体与药物作用,进而影响药物的生物学和药理学等性质嘲,因此稀土离子对中药小分子与蛋白相互作用影响的研究越来越受到人们的关注l_7]。目前有关稀土离子一中药小分子一蛋白三元体系的研究较少Is],而稀土离子一呋喃香豆素类药物一LYSO相互作用的研究尚r未见报道本文以上述四种呋喃香豆素类药物为研究对象,采用荧光光谱法和同步荧光光谱法研究La”、Gd”、Yb抖和Iu。。。介导下四种呋喃香豆素类药物与LYSO的相互作用,同时比较其对呋喃香豆素类药物与LYSO结合作用的介导能力,从而探讨不同稀土离子介导下,四种呋喃香豆素类药物与
5、LYSO的作用机理,为稀土离子及呋喃香豆素类药物在体内的分布、代谢及毒性机理等临床研究提供一定的实验依据和理论基础。1实验部分1.1仪器与试剂CaryEclipse荧光光度计(美国,Varian公司),Peltier电子恒温装~;TU-1901紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);AL一104型电子天平(MettlerToledo仪器(上海)有限公司)pHS一3C数字收稿日期:2012—12—03修回日期:2012—12—25基金项目:山西省自然科学基金(No.2010011048—1);山西医科大学科技创新基金(01200806);太原市201
6、2年科学技术发展计划大学生创新创业项目(120164073)*通讯作者:张爱平,女,教授,主要从事药物小分子与生物大分子的相互作用的研究.785第6期宋志英等:稀土离子介导下呋喃香豆素类药物与溶菌酶的作用机理第29卷酸度计(上海雷磁仪器厂)。LYSO储备液:准确称取0.0698gLYSO标准品(美国,Sigma公司),用pH为7.40三羟基甲基氨基甲烷一盐酸(Tris—HC1)缓冲溶液配制,其储备液(1.00×10mol·L)4℃下避光保存;补骨脂素、异补骨脂素、5一甲氧基补骨脂素和8一甲氧基补骨脂素均购自上海顺勃生物技术有限公司(纯度均大于98),用99.7
7、%的无水乙醇配制成浓度为1.OO×10tool·L的储备液;La、Gd抖、Yb抖和Lu。溶液分别由其氧化物(纯度≥99.99,包头稀土研究院)加浓盐酸溶解,蒸发除去多余盐酸,以去离子水定容,用乙二胺四乙酸(EDTA)标定;Tris—HC1缓冲溶液(pH一7.40)用0.20mol·L的Tris和0.10mol·L盐酸配制,内含0.1tool·L的NaC1溶液;其他所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水。1.2实验方法1.2.1紫外光谱测定在4支10mL比色管中准确加入1.00mL1.00×10mol·I的补骨脂素溶液,分别加入1.00mL1.00×10mol·
8、LLa”、Gd”、Yb抖和Iu”的溶液
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