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《大豆查尔酮还原酶基因GmCHR的克隆与植物表达载体构建-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第32卷第2期大豆科学V0l_32No.22013正4月SOYBEANSCIENCEApr.2013大豆查尔酮还原酶基因GmCHR的克隆与植物表达载体构建刘江,陈沛,邢光南,赵团结,李艳,盖钧镒(南京农业大学大豆研究所/国家大豆改良中心/农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室/作物遗传与种质创新国家重点实验室,江苏南京21o0951摘要:黄酮类化合物在植物中参与过滤紫外线、固氮和花色形成等过程,异黄酮对人体有抗氧化、预防乳腺癌等保健作用。查尔酮还原酶(chalconereductase,CHR)是植物中参与黄酮类化合物代谢的重要酶。克隆
2、大豆查尔酮还原酶基因并构建植物表达载体,有助于进一步研究其功能和异黄酮的代谢过程。采用RT—PCR方法,从栽培大豆(Cry-cinemax)南农1138-2中,克隆得到了第14号染色体上的一个编码大豆查尔酮还原酶(chalconereductase,CHR)的基因,命名为GmCHR。该基因含有948bp长的编码区序列(CodingDNASequence,CDS),编码315个氨基酸。预测其蛋白质分子量为35.5kDa,等电点为6.32。与其他豆科植物中的查尔酮还原酶相比,GmCHR蛋白序列与葛藤(Puerari—aemontana)C
3、HR的相似性最高,达94%。组织表达分析表明,在自然生长条件下GmCHR在叶中的表达量最大;其次是种子;在花和茎中相同;在根中的表达量最小。利用Gateway方法获得植物过表达载体pMDC83一GmCHR,经检测表明过表达载体已成功转化农杆菌EHA105,为今后进一步了解GmCHR在大豆异黄酮代谢过程中的功能提供材料基础。关键词:大豆;异黄酮;查尔酮还原酶;基因表达中图分类号:$565.1文献标识码:A文章编号:1000-9841(2013)02-0139-04CloningoftheSoybeanChalconeReductaseG
4、eneGmCHRandConstructionofItsPlantExpressionVectorLIUJiang,CHENPei,XINGGuang—nan,ZHAOTuan-jie,LIYan,GAIJun—yi(SoybeanResearchInstitute,NanjingAgriculturalUniversity/NationalCenterforSoybeanImprovement/MOAKeyLaboratoryforBiologyandGeneticIm。provementofSoybean(Genera1)/Nat
5、ionalKeyLaboratoryofCropGeneticsandGermplasmEnhancement,Nanjing210095,China)Abstract:FlavonoidsareinvolvedillUVfiltration,symbioticnitrogenfixationandfloralpigmentationinplants.Isoflavoneshavepotentialeffectso13humanhealth,suchasantioxidantactivity,preventingbreastcance
6、l"andothercancers.Chalconere-ductasefCHR)isanimportantenzymeinvolvedinflavonoidbiosynthesis.Cloningofsoybeanchalconereductaseandconstruc-tionofitsplantexpressionvectorwouldhelpstudyitsfunctionandthephenylpropanoidpathway.AgeneencodingCHRonchromosome14wasclonedfromthecul
7、tivatedsoybean(Glycinemax)cultivarNannongl138-2usingRT—PCR,andwasdesig-natedasGmCHR.ThisgenecontainsacodingDNAsequence(CDS)of948bp,andthecorrespondingproteinconsistsof315a-minoacids.Theproteinisestimatedtohaveamolecularweightof35.5kDaandisoeleetricpointof6.32.Comparingw
8、iththeaminoacidsequenceofCHRfromotherlegumespecies.GmCHRhasahighestsimilarityof94%withtheCHRfromPuerariaemonta
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