槐米中芦丁的提取分离与鉴定.doc

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1、槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、实验目的1＞通过芦丁的捉取与精制掌握碱酸法捉取黄酮类化合物的原理及操作。2、通过芦丁结构的鉴定，了解昔类结构研究的一般程序和方法。二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mpl74°C・178°C。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲B1:10.桝皮索：黄色结晶，mp313°C・314°C（2分子结品水），能溶解于冷乙醇（1:650）,易溶于沸乙醇（1:60）,可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚疑基，显弱酸性

2、，可溶于碱中，加酸酸化后乂可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯屮，加入沸水400ml及lg硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9）,并随吋补充蒸发掉的水分,趁热用双层纱布滤过,收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60°C-70°C再用盐酸调至PH4-5,静置一周，析出芦丁。五、实验说明及注意事项1、木实验采用碱溶

3、液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9,不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5,不宜过低，否则会使芸香甘成悻盐溶于水，降低了收率。2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚径基不被氧化，亦保护邻二酚瓮基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成背元的方法及二者z间的分离。2、熟悉芦丁、榊皮素的结构性质、检识方法和纸层

4、析鉴定方法。二实验原理芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，牛•成桝皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及榊皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。三、药品材料芦丁粗品、硫酸、盐酸、氢氧化钠、镁粉、-蔡酚、三氯化铝、葡萄糖溶液、鼠李糖溶液、95%乙醇、碳酸顿、广泛PH试纸、层析滤纸等。四、实验操作（-）芦丁的提取和精制1、芦丁的提取：取前次操作芦丁沉淀液，慢慢倾去上清液后，抽滤，沉淀用少量冷水洗涤2・3次，抽干，得到芦丁的粗产物。2、重结晶：称定粗品芦丁的重量，按约1:200的比例悬浮于蒸憾水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解

5、，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置于空气中晾干或60°C-70°C干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。3、芦丁的水解：取芦丁辽，置于250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液80ml直火微沸回流1小吋，至析出的黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制桝皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶即得精制榊皮素。取水解后的母液20ml,加入碳酸锁细粉中和至PH7,滤除生成的碳酸顿沉淀。滤液置水浴上浓缩至l・2ml,供纸色谱用。（-）鉴定1、性质实验（1）盐酸■镁粉反应：取芦丁少量置于试管中，加lml乙醇使溶解,加5

6、滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化的情况。（2）Molisch反应：取芦丁和榊皮素少量，分别置试管中各加lml乙醇使溶解，加儿滴a■蔡酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁加浓硫酸10滴，注意观察两液面间产生的颜色变化，并比较芦丁和榊皮素的区别。2、色谱鉴定（1）芦丁及楓皮素的纸色谱检识点样：取新华1号滤纸；距下端3cm处用铅笔划线，为起始线，隔1.5cm处点样品。将点好的样品的滤纸挂在层析杠中饱和半个小吋,再上行展开。支持剂：层析滤液（5cm*10cm）展开剂：正丁醇■醋酸■水（4:1:5）上层样品：自制榊皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品：芦丁标准的乙醇溶液显色剂：a、

7、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点b、喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点（2）糖的纸色谱检识支持剂：层析滤纸（5cm*10cm）展开剂:正丁醇■醋酸■水（4:1:5）±层样品：水溶液对照品：1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品溶液显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105°C烘焙5分钟至斑点显色清晰（3）芦丁及榊皮素的薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶G板，105°C-110°C活化1小吋展开剂：氯仿■甲醇■甲酸（15:5:1）样品：口制榊皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品芦丁标准品的乙醇溶液显色剂：a、可见光下观察色斑，紫外灯下观