试论靶向ASGPR的反义核酸体外抗HBV作用.doc

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1、试论靶向ASGPR的反义核酸体外抗HBV作用【摘要】目的研究以宿主基因ASGPR为靶的反义核酸的抗-HBV作用，为HBV感染的用药提供新的思路。方法以HepG212115细胞为靶细胞，脂质体为载体将靶向ASGPR的硫代反义寡核莒酸(ASODN)转染至HepG212U5细胞中,72h后收集细胞培养液，采用酶联免疫法及荧光定量PCR法测定细胞培养液中HBsAg、HBeAgo结杲结杲表明，随着浓度的升高,ASODN抗HBsAg,HBeAg和HBVDNA的作用逐渐增强。当ASODN高于0.5(imol/L.时作用逐渐减弱。结论ASODN具有抗HB

2、sAg,HBeAg和HBVDNA的作用。【关键词】寡核昔酸反义乙型肝炎病毒[Abstract]ObjectivelbinvestigatetheinhibitoryeffectsagainstHBVofaphosphorothioateantisenseoligodeoxynucleotide“ASODN"targetedtoASGPRinvitro・TheassayattemptedtoaccessanewmethodandideatorefreshthethinkingwayabouthepatitisBtreatmentbytheA

3、SODNtargetedtoasialoglycoproteinreceptor(ASGPR).Methods(ASGPR)mRNAwassynthesizedUsingHepG212115cellasthetargetcell,ASODNwastransfectedintoHepG212115cellbylipofection.Thecultureswereincubatedfor72h.Thencellmediawerecollectedanddetected.HBVDNAlevelincellmediumwasexaminedbyr

4、eal-timePCR.HBsAgandHBeAgweredetectedbyELISAl.ResultsOurResultsshowedthatASODNshowedanadditiveeffecttowardstheinhibitionofHBsAg,HBeAgandHBVDNAWiththeincreasingofASODNconcentration.TheeffectdecreasedgraduallywhenthelevelofASODNconcentrationhigherthan0.5gmol/L.ConclusionIti

5、sconcludedthatundercertainexperimentalconditions,theASODNisapowerfulanti-HbsAg,anti-HbeAgandHBVDNA.［Keywords】antisenseoligodeoxynucleotideshepatitisBvirus乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性疾病。发展中国家发病率高［1］。乙型病毒性肝炎以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。少数患者可转化为肝硬化或肝癌。，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流

6、行最为广泛、危害性最严重的一种传染病。血清中HBsAg阳性是HBV感染的标志［3,4］。本身具有抗原性，无传染性。HBeAg为HBV复制的重耍指标［5,6］o在于乙肝表面抗原阳性血液中。HBV-DNA阳性是表示HBV复制的最可靠指标。近年用多聚酶链反应（PCR）这一体外DNA扩增技术，可测出极微量的病毒.反义寡核订酸（antisenseoligonucleotide）通常指进彳亍了某些化学修饰的短链核酸（约15-25个核昔酸组成），它的碱基顺序排列与特定的靶标RNA序列互补，与靶标基因的RNA结合后可通过各种不同的机制影响靶标基因的表达。

7、反义寡核昔酸可用于基因沉默，所以是一种研究基因功能的重要工具。大多数药物属于靶标基因（或疾病基因）的抑制剂，因此反义寡核昔酸模拟了药物的作用.在靶标实验中证明有效的反义寡核甘酸本身还可以被进•步开发成为反义寡核昔酸药物[9,10]o去唾液酸糖蛋白受体(AsialoglycoproteinReceptorASGPR)是肝细胞的一种垂要且高效的内吞受体，主要分布于肝小叶门静脉周围肝细胞的窦面膜上，又名肝凝集素(liverlectin).,ASGPR的主要生理功能是负责清除去唾液酸糖蛋白、凋亡细胞和脂蛋白等。在肝脏基因定向转移、靶向药物治疗当中

8、具有较高的应用价值[ll]o以往研究表明，根据去唾液酸糖蛋口受体(asialoglycoproteinreceptor,ASGPR)基因mRNA的二级结构设计并筛选出的反义寡核首酸(anti2