反义核酸对宫颈癌细胞作用的研究

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1、反义核酸对宫颈癌细胞作用的研究刘品多2015年5月中图分类号：TQ028.1UDC分类号：540反义核酸对宫颈癌细胞作用的研究作者姓名刘品多学院名称生命学院指导教师李岩教授答辩委员会主席崔景荣教授申请学位理学硕士学科专业药学学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年6月Thestudyonanti-tumoreffectsofantisenseoligonucleotideinHelacellsCandidateName：LiuPinduoSchoolorDepartment:LifeSchool

2、FacultyMentor:Prof.LiYanChair,ThesisCommittee：Prof.CuiJingrongDegreeApplied:MasterofScienceMajor：PharmacyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：5，2015研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他人已经发表或撰写过

3、的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士学位论文摘要背景：癌症早期的发生发展及癌细胞的生长、侵袭、转移和预后都与血管生成有密切关系。新生血管为肿瘤提供营养，促进肿瘤生长，是肿瘤侵袭转移的前提条件。血管内皮生长因子C（VEGF-C）是目前所知道的作用最强的促进血管生成因子，参与血管生成的多个环节。且具有生成淋巴管的功能。反义药物作为一类新

4、型生物技术来源药物,在抗癌治疗中显示了良好的前景，针对VEGF-C的靶向治疗有可能成为治疗宫颈癌的新方法，本文以VEGF-C为靶标设计一段反义核酸，针对其对人宫颈癌细胞（Hela）的作用进行研究。目的：研究VEGF-C反义核酸及其与紫杉醇联合应用对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响及其初步探讨其作用机制。方法：体外培养人宫颈癌细胞（Hela)，分为对照组（Control）、反义寡核苷酸组（ASODN）、随机序列组（Random）、紫杉醇组(Taxol)、反义寡核苷酸联合紫杉醇组(ASODN+Taxol)、随机

5、序列联合紫杉醇组(Random+Taxol)。采用MTT法检测各组Hela细胞的生长增殖，划痕实验检测各组Hela细胞的迁移程度。RT-PCR检测各组mRNA的表达，ELISA检测Hela细胞上清中VEGF-C的分泌。结果：（1）ASODN组具有明显的抑制Hela细胞增殖作用。在48h时增殖抑制率达到39.1%。无论是24h或是在48h时，与Control组相比，Random组均无显著性差异。ASODN+Taxol组对Hela细胞的增殖抑制率高于Taxol组，且具有显著性差异。说明ASODN对Hela

6、细胞具有增殖抑制作用，与紫杉醇联合应用后具有协同作用。（2）ASODN组能够显著抑制Hela细胞迁移。而随机序列组与对照组相比无显著性差异。紫杉醇组对Hela细胞的迁移抑制作用高于反义核酸组。与紫杉醇组相比，反义核酸联合紫杉醇组队Hela细胞的增值抑制作用有一定程度的升高。随机序列联合紫杉醇组则无明显差异。说明反义核酸对Hela细胞有迁移抑制作用，与紫杉醇联合应用后能够增加对Hela细胞的迁移抑制作用。（3）与对照组相比，ASODN组mRNA表达的比值明显下降，反义核酸联合紫杉醇组mRNA表达的比值明

7、显下降。随机序列组、紫杉醇组以及随机序列联合紫杉醇组无明显变化。说明反义核酸能够抑制Hela细胞中mRNA的表达。（4）与对照组相比，反义核酸组的VEGF-C含量明显降低，反义核酸联合紫杉醇组的VEGF-C含量显著下降。说明VEGF-C反义核酸能够显著下调hela细胞中VEGF-C的表达。结论：反义核酸能够通过下调mRNA及蛋白的表达抑制hela细胞的增殖及迁移I北京理工大学硕士学位论文作用，且与紫杉醇联用后有一定程度的增强作用。关键词：VEGF-C；宫颈癌；反义核酸；血管生成II北京理工大学硕士学位

8、论文AbstractBackgroud:VEGF-Cisaspecificlymphaticendothelialcellgrowthfactor,whichisexpressedintheperi-canceroustissue,anditsroleofpromotingtumorcellgrowthandangiogenesishavebeenreportedinmoreandmoreliteratures.Inthisstudy,VEGF-CASO