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《三氧化二砷对乳腺癌细胞株抑制作用及其机制探析.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、三氧化二碑对乳腺癌细胞株抑制作用及其机制探析作者单位：056105河北省冀中能源邯郸矿业集团总医院（赵振江）；邯郸市中心医院（李海新）通讯作者：赵振江【摘要】目的探讨三氧化二碑（arsenousoxide,As203）对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其机制。方法对乳腺癌MCF-7细胞株进行培养传代oAs203作用于细胞一定时间后利用流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡率；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测survivin基因的表达；电镜观察乳腺癌细胞凋亡情况。结果As203对乳腺癌细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主；凋亡抑制因子surviv
2、in基因在乳腺癌细胞中表达；乳腺癌细胞经As203作用后，能抑制survivin基因的表达。结论As203可能通过抑制凋亡抑制因子survivin基因的表达，促进细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤的作用。【关键词】三氧化二碑；细胞凋亡；癌基因本实验以MCF-7乳腺癌细胞为靶细胞，观察As203对MCF-7细胞的生长抑制作用。1材料与方法1.1细胞培养及给药方法乳腺癌MCF-7细胞经培养进入对数生长期时，以一定浓度接种于培养板中，贴壁后给药,三氧化二碑组选用0.5ug/mK1.0ug/ml,2.0ug/ml三种浓度，在给药48h后，分别对诱导MCF-7
3、细胞凋亡状况进行检测。生理盐水作为阴性对照组，1.0ug/mlDDP作为阳性对照组。1.2流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡率收集各As203组细胞1X107个,1000Xg离心5min,细胞沉淀用PBS洗1次，分散成单细胞悬液，加入70%冷乙醇4°C固定过夜。1000Xg离心5min,弃去上清液，用少量PBS重悬细胞，加入碘化丙噪PI,终浓度为50ug/ml,混匀，41放置lh,在流式细胞仪上检测细胞凋亡率。1.3透射电子显微镜观察透射电镜下肿瘤细胞超微结构观察收集培养细胞，用PBS洗2次，2.5%戊二醛4乜固定，1%饿酸后固定30min,梯度
4、酒精脱水，树脂包埋，超薄切片，铅铀染色透射电镜观察，拍照。1.4RT-PCR检测survivin基因的表达在MCF-7细胞培养瓶内加入As2O3(1.5ml/well),细胞100%病变后消化收集各组细胞，采用TRIZ0L法提取总RNA,用DNA/RNA测定仪测定RNA的浓度和纯度。常规方法进行逆转录。PCR反应条件为：94°C预变性5min,94°C30s,56°C退火30s,72°C延伸45s,30个循环oSurvivin引物序列上游：5'-TCTCAAGGACCACCGCATCT-3'；下游：5'-GACAGAAAGGAAAGCGCA
5、ACC-3,,扩增产物为229bp；3-actin±游：5'-TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA-3'；下游：5'-TCAGGAGGAGCAATGATCTTG-3',扩增产物为302bpoPCR产物经8%聚丙烯酰氨凝胶电泳，漠化乙锭（EB）显色,Bio-profif凝胶图像分析系统进行摄像分析。通过survivin/B-actin的灰度比值作相对定量。1.5统计学处理数据分析应用SPSS12.0软件处理，计量资料以均值土标准差（x土s）表示，使用t检验。2结果2.1流式细胞术分析实验组的肿瘤细胞均可见有G1前期细胞形成的凋亡峰，阴性对
6、照组对照组（1A）、0.5ug/ml组（1B）、1.0ug/ml组（1C）、2.0ug/ml组（1D）凋亡率分别为5.4%、21.9%、26.4%、36.9%。见图1。2.2透射电镜下肿瘤细胞超微结构改变三氧化二碑（2Ug/ml）时透射电镜下见细胞质浓缩，核碎裂，染色质浓缩于核膜（图2）。2.3As203诱导乳腺癌细胞凋亡时survivin基因表达的变化从图3可知，survivin基因在乳腺癌细胞中存在髙表达。RT-PCR结果显示，As203诱导乳腺癌细胞凋亡时，survivin基因的mRNA受到抑制。对照组Survivingene/B-a
7、ctin为（0.502±0.174）,阳性对照组为（0.407±0.134）,1.0ug/mlAs203组为（0.392±0.105）,DDP组和1.0TMAs203组分别与细胞对照组比较，差异均有统计学意义（P
