毛细管电泳法筛选克伦特罗的核酸适配体.pdf

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1、毛细管电泳法筛选克伦特罗的核酸适配体王勇2015年6月中图分类号：UDC分类号：毛细管电泳法筛选克伦特罗的核酸适配体作者姓名王勇学院名称生命学院指导教师屈锋教授答辩委员会主席张小玲教授申请学位理学硕士学科专业生物学学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年6月ScreeningofaptamersagainstclenbuterolbasedonCapillaryElectrophoresisCandidateName：YongWangSchoolorDepartment:SchoolofLifeScienceFacultyMen

2、tor:Prof.FengQuChair,ThesisCommittee:Prof.XiaolingZhangDegreeApplied:MasterofPhilosophyMajor：BiologyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：June，2015研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学

3、或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士学位论文摘要核酸适配体（Aptamer）是指通过指数富集配体系统进化技术（SELEX）从随机寡核苷酸文库中筛选得到的高亲和性与特异性的寡核苷酸序列。毛细管电泳（CE）技术具有分离效率高、分析速度快、实验成本低、样品用量少、分离模式多的优势。CE-SELEX技术将CE技术用于SELEX中快速分离靶标-核酸复合物的筛选过程，继承了CE的优点，提高了SELEX的筛选效率。本

4、文以克伦特罗为靶标建立了筛选小分子靶标核酸适配体的CE-SELEX方法，并筛选得到具有一定亲和力的克伦特罗的核酸适配体。论文分为五部分：一、介绍了Aptamer的概念、SELEX技术原理，综述了小分子核酸适配体筛选方法的研究进展。介绍了毛细管电泳特点、分析模式和CE-SELEX的优点以及论文的研究内容、研究意义。二、建立了克伦特罗的毛细管电泳分析方法，并对克伦特罗与ssDNA和80mer的随机寡核苷酸文库的相互作用进行了毛细管电泳表征，证明两者之间存在相互作用。三、利用毛细管电泳法和荧光实时定量PCR技术（Q-PCR）对筛选过程中的P

5、CR结果进行表征，优化了PCR过程的退火温度和循环数，优化了制备单链次级库的不对称PCR的引物比例。四、将80mer的随机寡核苷酸文库与靶标混合，收集复合物并进行PCR扩增，再通过不对称PCR制备单链次级库。利用毛细管电泳技术进行了4轮SELEX筛选，并对每轮次级库进行了亲和力表征。五、将筛选的13条ssDNA测序。用DNAMAN软件对它们进行二级结构模拟分析，选择亲和力较高的适配体c12测定了其与克罗特结合的解离常数。关键词：毛细管电泳；核酸适配体；克伦特罗；SELEXI北京理工大学硕士学位论文AbstractAptamersare

6、shortsingle-strandedoligonucleotidesequenceswithhighaffinityandspecificityforcertaintargetsscreenedthroughtheSystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment(SELEX)techniquefromtherandomoligonucleotidelibrary.CapillaryElectrophoresis(CE)isapowerfulseparationtechnolog

7、ywithhighefficiency,fastanalysisspeed,lowcost,variousseparationmodes.InheritedtheadvantagesofCE,CE-SELEXtechnologycanquicklyseparatetarget-nucleicacidcompounds,improvingtheefficiencyoftheSELEX.Inthisthesis,aCE-SELEXmethodscreeningforaptamersagainstsmallmoleculetargetswa

8、sestablished,andsingle-strandedDNAaptamersagainstclenbuterolwasselected.Therearemainlyfivepartsinthisthesis.(1