有机磷酸酯类中毒及解救

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1、有机磷酸酯类中毒及解救ToxicationandDetoxicationofOrganophosphates【目的和原理】观察有机磷酸酯类（organophosphates）中毒的症状，理解解救药阿托品、解磷定的解救作用及机制。掌握家兔耳缘静脉注射的方法。Organophosphates通过抑制胆碱酯酶（cholinesterase，AChE）活性，使乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）在体内堆积，产生中毒症状。抗胆碱药阿托品能解除有机磷酸酯类中毒的M样症状，而解磷定可复活AChE，恢复其水解ACh的能力，

2、对M及N样症状均有效，以缓解骨骼肌震颤的效果最快，两药合用可提高解救效果。【实验动物】家兔，体重2.5～3.0kg。【实验器材和药品】兔固定箱、测瞳尺、听诊器、注射器（5ml、10ml、20ml）、针头、兔耳夹、脱脂棉球、台秤、722分光光度计、恒温水浴箱、试管及试管架、加样器、effendorff管、滤纸。10%美曲膦酯[敌百虫(depterex)]、0.05%硫酸阿托品（atropinesulfate）、2.5%解磷定（pyridinealdoximemethiodide,PAM）、生理盐水（saline）。【实

3、验步骤和观察项目】1．健康家兔5只，称体重，分为5组，分别为空白对照组（甲）、模型组（乙）、给解救药组：atropine组（丙）、PAM组（丁）、atropine+PAM组（戊），观察并记录各组家兔的活动情况：呼吸（频率、幅度、肺呼吸音、有无呼吸困难，呼吸道有无分泌物等），瞳孔大小（pupillarysize），唾液分泌（salivarysecretion），大小便（urinationanddefecation），肌张力（musculartension）及有无肌肉震颤（muscletremor）等。2．将甲、乙、丙、

4、丁、戊、五只家兔分别放于兔固定箱内，甲兔由耳缘静脉给予saline（1ml/kg）；乙、丙、丁、戊兔分别由耳缘静脉缓慢注入depterex（1ml/kg），给药后密切观察上述指标的变化并记录。待M样、N样中毒症状均较明显时，乙兔不予解救药，使其中毒症状充分表现出来，如果死亡，分析死亡原因；丙兔耳缘静脉注射atropine（2ml/kg），丁兔耳缘静脉缓慢注射PAM（4ml/kg），戊兔耳缘静脉先atropine（2ml/kg），而后注射PAM（4ml/kg），观察中毒症状有何变化，atropine和PAM分别改善了哪

5、些症状？3.实验结果记录:一般呼吸心率瞳孔唾液大小便肌张力肌震颤状态次/min次/min大小分泌给药前给敌百虫给阿托品给解磷定阿+解附：胆碱酯酶活性测定（determinationofactivityofAChE）【目的和原理】学习AChE活性的测定方法,观察中毒前后及使用不同解救药后AChE活性的变化。ACh在血液中被AChE水解，产生醋酸和胆碱。在一定范围，水解的ACh量与AChE的活性成正比。故在反应体系中，加入定量的ACh使之参加反应，通过测定剩余的ACh即可计算出水解ACh的量，从而推算出AChE活性。AC

6、h的呈色反应ACh可与羟胺反应生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映ACh含量。反应过程如下：(1)盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺NH2OH·HCL+NaOH→NH2OH+NaCL+H2O(2)剩余ACh与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物（CH3）≡N—(CH2)2OCOCH3+NH2OH→CH3CONHOH+（CH3）3≡N—（CH2）2OH(3)羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色复合物（羟肟酸铁络合物）酸性Fe/3FeCL3+CH3CONHOHCH3C

7、ONHO+HCL(棕红色)【实验药品】(1)7×10-3mol/L氯化ACh：取ACh用蒸馏水配成2.54％溶液，冰箱保存。用前以蒸馏水20倍稀释即成7×10-3mol/LACh溶液。(2)1mol/L盐酸羟胺（NH2OH·HCL）：取25g盐酸羟胺，加蒸馏水359ml，冰箱保存。(3)3.5NNaOH。(4)4NHCL。(5)3.7×10-1mol/L三氯化铁（FeCL3·6H2O）：取10g三氯化铁，加蒸馏水至20ml，浓HCl0.84ml，加温溶解，最后加蒸馏水至100ml制成3.7×10-1mol/L三氯化铁

8、（FeCL30.1NHCl）溶液。(6)PH7.2的磷酸缓冲液：取Na2HPO4·12H2O16.72g和KH2PO42.72g加蒸馏水至100ml，冰箱保存。【实验步骤】(1)家兔在给药前、中毒症状明显后、给atropine待症状明显缓解后、给予PAM解救后0min、10min、20min、30min等时间点分别由兔耳缘静脉或股静脉取血0.5