抗HBVG145RHBsAg多克隆抗体制备及鉴定

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1、抗HBVG145RHBsAg多克隆抗体制备及鉴定【摘要】目的实验性rG145R变异抗HBs多克隆抗体。方法采用纯化全基因重组G145R变异HBsAg常规皮下免疫制备小鼠多克隆抗体，以间接ELISA、SDS-PAG及Westernblot等多种实验对制备物进行鉴定，并初步应用于转染CHO细胞的化学染色。结果制备物在Westernblot.ELISA中和试验与抗原替代ELISA中与重组G145R变异HBsAg及重组野生HBsAg等均有很好的特异性与反应性；对此两种抗原的ELISA效价前者显著高于后者（

2、分别为51200与6400）:将其用于2A8细胞（转染并分泌G145RHBsAg）爬片的PAP染色，亦取得较理想的实验结果。结论采用重组G145R变异HBsAg免疫成功制备出较高效价的抗体。鉴于该抗体同时与野生重组wHBsAg存在较强交叉反应，其与野生抗HBs的混合应用能增ELISA免疫逃逸变异的检测能力。口【关键词】乙型肝炎病毒；基因变异；合成肽；多克隆抗体□口Thepreparationandidentificationofanti-HBVG145RHBsAgpolyclonalantibod

3、yLIPei-shan,GONGJing-song,LIShi-jun,etal.BiologicalTechnologyGroupCorporation,WuhanInstituteofBiologicalProducts,Hubei430060,China□[Abstract]ObjectiveToprepatethemousepolyclonalAntiG145RrHBsAbandanalyzeitsimmunologicalcharacteristics・MethodsTherecombi

4、nantG145RmutantHBsAgwererespectivelyusedtodeveloppoly-clonalantibodysthroughimmunizeBALB/crats,andthepolyclonalantibodywereconfirmedbyempiricalmethods,includewesternblot,ELISAandSDSPAGE,andpreliminaryusedinchemicalstainingfortheCHO.ResultsTherecombina

5、ntG145RmutantHbsAbpolywereindentifiedbywesternblotandELISA,itshowedagoodspecificreactionperformeneetobothofG145RrHBsAgandr-wHBsAg.AndthepotencyofthereactionwithG145RrHBsAgwasobviouslyhigherthanr-wHBsAg(theywere51200and6400).AndithadagoodresultofthePAP

6、stainingofcell2A8also・ConclusionThesatisfactoryantibodycouldbecreatedbyimmunizingwithG145RrHBsAg.Becauseofthecrossreactionwithr-wHBsAg,therecombinantG145RmutantHbsAbpolywhichismixedwithr-wHBsAgcanenhaneethedetectivityofELISA•口[Keywords]HepatitisBvirus

7、;Genevariation;Syntheticpeptide;PolyclonalantibodyHBV具有较高的变异趋势，发生在S蛋白七”决定簇基因区段的突变可能导致其HBsAg抗原性改变而形成免疫逃逸株(immuneescapemutantstrain,IEMS)[1]o由S基因第nt587位G-A突变所产生G145R变异株(G145RIEMS)是其中发生频率最高，抗原性飘逸最彻底的IEMS之一口~4]o受实验材料限制，对该变异的研究仅限于其变异机制及其分子流行病学调查。为进一步拓展对其基础

8、与临床研究范围，笔者进行抗重组G145R变异S蛋白多克隆抗体(抗rG145RHBspoly)的制备研究，现报道如下。口1材料与方法口11实验材料重组G145R变异S蛋白(r-G145R-HBsAg)由同济医院医学实验中心采用亲和层析法制备[3];HBsAg◎'决定簇合成多肽(G145R-SP24,包含123-147位氨基酸X腺病毒抗原初提物(ADV-AgX2A8细胞爬片以及PAP染色试剂等由同济医院医学实验中心提供;HRP标记羊抗鼠IgG(GAM-HRP)购自Sigma公司。抗HB