抗hbv g145r hbsag多克隆抗体制备及鉴定

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1、抗HBVG145RHBsAg多克隆抗体制备及鉴定【摘要】目的实验性rG145R变异抗HBs多克隆抗体。方法采用纯化全基因重组G145R变异HBsAg常规皮下免疫制备小鼠多克隆抗体，以间接ELISA、SDS-PAG及Westernblot等多种实验对制备物进行鉴定，并初步应用于转染CHO细胞的化学染色。结果制备物在Westernblot、ELISA中和试验与抗原替代ELISA中与重组G145R变异HBsAg及重组野生HBsAg等均有很好的特异性与反应性；对此两种抗原的ELISA效价前者显著高于后者（分别为51200与6400）；将其

2、用于2A8细胞(转染并分泌G145RHBsAg)爬片的PAP染色，亦取得较理想的实验结果。结论采用重组G145R变异HBsAg免疫成功制备出较高效价的抗体。鉴于该抗体同时与野生重组wHBsAg存在较强交叉反应，其与野生抗HBs的混合应用能增ELISA免疫逃逸变异的检测能力。�【关键词】乙型肝炎病毒；基因变异；合成肽；多克隆抗体��Thepreparationandidentificationofanti-HBVG145RHBsAgpolyclonalantibodyLIPei-shan，GONGJing-song，LIShi-ju

3、n，etal.BiologicalTechnologyGroupCorporation,WuhanInstituteofBiologicalProducts，Hubei430060，China9�【Abstract】ObjectiveToprepatethemousepolyclonalAntiG145RrHBsAbandanalyzeitsimmunologicalcharacteristics．MethodsTherecombinantG145RmutantHBsAgwererespectivelyusedtodevelopp

4、oly-clonalantibodysthroughimmunizeBALB/crats,andthepolyclonalantibodywereconfirmedbyempiricalmethods,includewesternblot,ELISAandSDSPAGE,andpreliminaryusedinchemicalstainingfortheCHO.ResultsTherecombinantG145RmutantHbsAbpolywereindentifiedbywesternblotandELISA,itshowed

5、agoodspecificreactionperformencetobothofG145RrHBsAgandr-wHBsAg．AndthepotencyofthereactionwithG145RrHBsAgwasobviouslyhigherthanr-wHBsAg(theywere51200and6400)．AndithadagoodresultofthePAPstainingofcell2A8also．ConclusionThesatisfactoryantibodycouldbecreatedbyimmunizingwit

6、hG145RrHBsAg．Becauseofthecrossreactionwithr-wHBsAg,therecombinantG145RmutantHbsAbpolywhichismixedwithr-wHBsAgcanenhancethedetectivityofELISA.� 9【Keywords】HepatitisBvirus;Genevariation;Syntheticpeptide;PolyclonalantibodyHBV具有较高的变异趋势，发生在S蛋白“a”决定簇基因区段的突变可能导致其HBsAg抗原性改变而形

7、成免疫逃逸株（immuneescapemutantstrain,IEMS）[1]。由S基因第nt587位G-A突变所产生G145R变异株（G145RIEMS）是其中发生频率最高，抗原性飘逸最彻底的IEMS之一[1～4]。受实验材料限制，对该变异的研究仅限于其变异机制及其分子流行病学调查。为进一步拓展对其基础与临床研究范围，笔者进行抗重组G145R变异S蛋白多克隆抗体（抗rG145RHBspoly）的制备研究，现报道如下。�1材料与方法�1．1实验材料重组G145R变异S蛋白（r-G145R-HBsAg）由同济医院医学实验中心采用亲

8、和层析法制备[3]；HBsAg“a”决定簇合成多肽（G145R-SP24，包含123～147位氨基酸）、腺病毒抗原初提物（ADV-Ag）、2A8细胞爬片以及PAP染色试剂等由同济医院医学实验中心提供；HRP标记羊抗鼠IgG（GAM-HRP）购自Si