抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立-论文.pdf

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1、田胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2014，30(2171·论著·文章编号：1007—8738(2014)02—0171—05抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立张晓磊一，聂玉哲一，蓝兴国，李玉花(东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040；：大庆麦伯康生物技术有限公司，黑龙江大庆163316；。东北林业大学大庆生物技术研究院，黑龙江大庆163316)[摘要]目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb)，建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠，通过细胞

2、融合、高通量筛选ELISA(HTS—ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性，最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后，其血清效价达到1：10。细胞融合及HTS．ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4，#18-3，#7_7，#56-5，亲和力都在1x10IMmol以上。间接ELISA结果显示，#2-4，#18．3，#7-7，#56-5分别特异性地与HBsAg的“d，Y，r，w”表位结合。用抗HBsAg“a”表位的mAb#3-1

3、1分别与这4株抗体组合，进行夹心ELISA检测。结果显示，不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的“d，Y，r，w”表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg4个表位的mAb，建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。[关键词]乙型肝炎表面抗原；单克隆抗体；表位；夹心ELISA[中图分类号]R446．61，R373．21，Q813．2[文献标志码]BPreparationofanti-HBsAgepitopemonoclonalantibodiesandestablishmentofasandwichELISAforHBVserotypedetectionZHANGX

4、iaolei一，NIEYuzhe一，LANXingguo，LIYuhuaCollegeofLifeSciences，NortheastForestryUniversity，Harbin150040；DaqingMabCom，Inc．，Daqing163316；。DaqingInstituteofBiotechnology，Northe~tForestryUniversity，Daqing163316，China[Abstract]ObjectiveTopreparethemonoclonalantibodiesagainstHBsAgepitopesandestablishasandwi

5、chELISAsystemforHBVserotypedetection．MethodsTheBALB／cmiceworeimmunizedwithHBsAgsubtypeproteins．Thehybridomacelswereculturedinserum—freemediumaftercellfusionandhighthroughputscreeningELISA(HTS-ELISA)．MonoclonalantibodieswerepurifiedwithproteinA．Thespecificity，afinity，isotype，andepitopeofthemAbswer

6、echaracterizedrespectivelyandthesandwichELISAsystemwasestablished．ResultsTheritersofmouseanti-serareached1：10．AfterthecellfusionandHTS-ELISA．thefourhybridomacelllineswereobtained．ThemAbswerepurifiedandnamed#2-4，#18-23，#7-7，#56-71，respectively．ThemAbshadahighafinity(over10L／mo1)．IndirectELISAshowe

7、dthat#2-4，#18-23，#7-7and#56-71couldrecognizeHBsAg“d，Y，r，w”epitopes，respectively．ThesandwichELISAwasestablishedthroughusing#3-11(Anti-HBsAg⋯a’epitope)asthecoatingantibodywhiletheHRPlabeledmAbasthesecondaryantibody．Theop