培养基配制及适用性检查标准操作规程

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1、培养基配制及适用性检查标准操作规程目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。范围：适用于微牛物检验人员对培养基的规范管理。依据：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版职责：1•微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。内容1培养基的屮购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应

2、商审计。2培养基的验收2.1培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。2.2验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02(00))。3培养基的贮藏第四部34未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4〜8°C冷藏保存待用。灭菌后

3、培养基储存期为7天。4培养基的配制4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。4.2培养基配制批号原则:原材料批号■配制日期:比如20口年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000,配制批号为:000000-110101o配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）o（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加加“数字”表示，如000000-110101-01）4.3培养基配制方法

4、4.3.1使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别,每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。4.3.2水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸憾水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行

5、预灭菌，以保证培养基的无菌性。4.3.3称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3o配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。4.4pH值的测定和调整pH值采用pH计进行检测，温度25±2°Co取配后培养基10ml进行灭前pH测定。另取20ml于50ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至

6、25±2°C检测灭后PH。灭菌前后pH应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/L（约lmol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约lmol/L）的盐酸溶液进行缓慢调整，避免反复调整而增2加离子浓度。灭菌后培养基不符合标准时视为不合格，不进行使用。4.5培养基灭菌培养基和试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。湿热灭菌在高压灭菌锅或蒸汽灭菌柜中进行，容器具若需湿热灭菌时，灭菌条件为121°C灭菌30mine培养基严格按说明书条件进行灭菌。培养基灭菌后应立即取出，不得存放于高压灭菌器中。5培养基

7、的质量控制5.1计数培养基适用性检查5丄1菌种及菌液制备菌种：试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表lo菌液制备：按表1规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌的新鲜培养物至胰酪人豆月东液体培养基中，35°C培养18-24小时，取上述培养物lml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10J的菌液，依法10倍稀释至10-7,分取

8、各菌悬液lml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆陈琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平血,平皿法培养计数，取小于100CFU/ml的菌液备用；取口色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，25°C培养2〜3天。取上述培养物lml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10・1的菌液，依法10倍稀释至10・7,取菌悬液lml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平1111,平血法培养计数，取小于100CFU/ml的菌液备