培养基配制适用性检查标准操作程序

《培养基配制适用性检查标准操作程序》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、题目培养基配制及适用性检查标准操作程序新订口修订口文件编号编制部门制定人审核人批准人制定曰期年月日审核曰期年月曰批准日期年月曰颁发部门生效曰期分发部门0的：制定培养基配制、培养基适用性检查的标准操作程序。范围：适用于微生物实验室培养基的配制和适用性检查。责任者：微生物检验员所用器具、仪器、材料、菌种器具、仪器：高压蒸汽火菌锅、高温火菌柜、隔水恒温培养箱、生化培养箱、双人净化操作台、单人净化操作台、干燥箱、恒温水浴锅、电子天平、500ml三角瓶、移液管、培养皿、试管、接种环、酒精灯材料：标准干燥培养基(购于生物研宄所)、待验证培养基菌种：人肠杆菌CMCC(B)44102

2、、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、白色念球菌CMCC(F)10231沙门氏菌CMCC(B)500941.培养基的配制1.1准备工作1.1.1选择适宜容量的容器配制试剂，配制培养基的容器应为玻璃容器，以避免接触金属离子，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，应按《玻璃容器清洗规程》洗涤、干燥、灭菌。1.1.2配制用水培养基配制用水应为纯化水，纯化水应临用新配。1.2配制1.2.1记录所用脱水培养基的品名、批号、生产日期、生产厂家及配制处方。1.2.2用分度值为0.01的电子天平准确按处方量进行称量并装入三角瓶内。1.2.3用量筒按照

3、培养基处方配比加入纯化水。1.2.4用硅胶橡皮塞塞上瓶门，轻轻振摇使充分混匀。1.2.5培养基在配置后必须进行PH值的测定，以确保符合药典要求和生产厂家的规定，一般情况下，PH值不能超过规制值±0.2。1.2.6用牛皮纸包扎瓶口，贴上标签，注明品名、批号、配置円期、配置人、有效期。1.3灭菌将上述己配制的培养基放入高压蒸汽灭菌锅按培养基灭菌条件进行灭菌（每次配制的培养基应在2小吋内进行有效火菌，否则极易染菌。若未能在2小吋内进行有效火菌，则倒掉重新配制）。若没有兵体要求，一般灭菌温度（压力）为121°C（O.IMPa）,灭菌时间为20分钟。灭菌完成后，待高压灭菌锅溫度

4、、压强自然下降为“0”值，方可取出灭菌好的培养基（不可未降温时拿出，否则培养基内外会形成负压，易染菌）。1.4培养基的保存1.4.1贮存条件待培养基冷却至室温，置洁净的冰箱冷藏室于4°C存放。（不得冻结，否则，融化后常因理化条件改变而不能再用）。1.4.2保存时限基础营养培养基座在2周内用完。生化鉴别培养基应在1周内用完。选择性分离鉴别培养基制成平板后应在24小时内用完。按时间差培养基质量（外观、失水、过期等情况），出现昇常应及时处理。质量出现问题的培养基应采取高温灭活处理方式（121120分钟）。1.5填写培养基配制记录1.6培养基的使用1.6.1配制的培养基应在有

5、效期内使用（4°C冰箱冷藏室储存保质期为15天）。1.6.2固体培养基灭菌后再融化只允许1次，再融化应注意温度及水分的控制，融化后的培养基应置于45〜50dC水浴中保存（时间不超过8小时）。1.6.3倾注培养基的温度应控制在50°C左厶。1.6.4倾注培养基前，应擦干培养基容器外壁的水，避免水滴进培养基中造成污染。2.培养基适用性检杳2.1准备工作2.1.1按上述操作程序配制待验证培养基和标准培养基，并火菌置冰箱冷藏室于4°C存放。2.1.2将购买的菌种（从生物研究所购买的菌中味第0代，传代次数不超过5代）从冰箱冷藏室取出，放于菌种接种室复至室温。2.1.3将待检查培

6、养基和标准培养基置于水浴锅屮融化，于45"C保温备用。2.1.4分别将待检查培养基和标准培养基各取约10〜15ml倒入试管，试管倾斜放置制成斜面备用。另分别将待检查培养基和标准培养基制备等量平板备用。2.2菌种接种在菌种接种室，用接种环分别挑取适量菌种划线接种于上述斜而培养基上。2.3菌液配制2.3.1将上述己接种的斜面培养物（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙氏门菌）的新鲜培养物接种至营养肉汤中，白色念球菌斜面培养物接种至10ml马丁培养基。白色念球菌置于20〜28°C生化培养箱，其他菌种置于30〜35°C隔水恒温培养箱中培养24〜48小时。男上述培养物用

7、0.9%氯化钠蛋白胨缓冲液制成每1ml含菌数为50〜100CFU的菌悬液。2.3.2菌液计数：取含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液各1ml（含活菌数50〜100CFU）分别注无菌平皿（每株试验菌制备2个平皿，作为对照），即刻倾注营养琼脂培养基，混匀，待凝固置30〜35°C隔水恒温培养箱中培养48小时。沙门菌接种至沙门志贺菌属琼脂培养基，凝固后置30〜35"C隔水恒温培养箱中培养48小时。白色念球菌接种至玫瑰红钠培养基，置20〜28°C生化培养箱培养72小时。培养后取出计数。2.4接种平板在菌种接种室，分别挑取上述已培养的新鲜菌种划线接种于