培养基配制及适用性检查操作规程

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1、题目培养基配制及适用性检查操作规程共3页编码:0S-ZL037-02制定人审核批准人制定口期审核口期批准口期颁发部门质量部颁发数量2份生效日期分发单位质量部1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确。2范围：适用于微生物限度检查用培养基。3责任人：质检员、化验主管。4内容：4.1微生物限度检查用培养基的配制4.1.1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、据瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、牛皮纸、天平、量筒。4.1.2根据配制量称取干燥培养基质，置拋瓷缸中，加入规定的纯化水或琼脂等使其溶解，将扼瓷缸放到电炉上加热煮沸。4.1.3根据培养基的配方要求调节PH值，将配好的培养基分装到若干个三角瓶

2、中，瓶口塞好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器中，灭菌条件为12I°C高压灭菌15分钟。4.1.4PH7.0氯化钠■蛋白月东缓冲液成分(g/L)蛋白腺氯化钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾重量lg4.3g3.56g7・23g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16克，加入1000ml纯化水中，微温溶解，分装，115°C高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干支试管中，直接接种法缓冲液9ml/管，试管口塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。4.1.5营养琼脂培养基成分(g/L)蛋白陈氯化钠牛肉膏粉琼脂重量10g5g3g15g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基33克，加入1000ml纯化

3、水中，加热煮沸溶解，分装，121°C高压灭菌15分钟备用。4.1.6玫瑰红钠琼脂培养基成分（g/L）重量成分（g/L）重量5g葡萄糖10g硫酸镁0・5g磷酸二氢钾lg琼脂14g玫瑰红钠0.0133g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基30.5克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121°C高压灭菌15分钟备用。4.1.7胆盐乳糖培养基成分(g/L)重量成分(g/L)重量20g牛胆盐10g乳糖5g磷酸氢二钾4g氯化钠5g磷酸二氢钾1.3g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基37克，加入1000ml纯化水屮，加热煮沸溶解，分装，121°C高压灭菌20分钟备用。4.1

4、.8培养基配制注意事项：(1)采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pll进行校验。(2)配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。(3)培养基的分装量不得超过容器的2/3,以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。(4)培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。(5)灭菌后的培养基应保存在2〜25°C,防止污染，可在3周内用毕；保存于密闭容器屮，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不宜过长，以免水分散失及染菌。(6)宜采用水浴加热熔化琼脂培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以免营养成份过度受热而破坏。(7)已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培

5、养基不宜再用。4.2培养基的适用性检查4.2.1微生物限度检查中计数用培养基包括：(营养琼脂、玫瑰红钠琼脂)、控制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。4.2.2计数培养基适用性检查试验用菌株大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]金黄色葡糖球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉菌(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]铜绿假单胞菌(Pseudomona

6、saeruginosa)[CMCC(B)10104]4.2.3检查方法4.2.3.1培养基制备按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠培养基（被检培养基和对照培养基）、胆盐乳糖培养基，灭菌后备用。4.2.3.2营养琼脂培养基4.2.3.2.1方法：取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、枯草芽孑包杆菌各2皿，每皿接种lml菌液（含菌50〜lOOcfu）,另一平W1不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30〜35°C倒置培养48h,计数；被检培养基同法操作。4.2.3.2.2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的

7、70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。4.2.3.3玫瑰红钠琼脂培养基4.2.3.3.1方法：取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50〜lOOcfu）,另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h,计数；被检培养基同法操作。4.2.3.3.2结果判断：若被检培养基的菌