计数培养基适用性检查标准操作规程

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1、计数培养基适用性检查标准操作规程SOP-QC-1022文件名称：计数培养基适用性检查标准操作规程文件编码：SOP-QC-1022版本号：00起草人:日期:审核人:日期:批准人:日期:生效日期年月日页码第1页，共5页颁发部门:质量部分发范围:质量部、质控部、档案室目的：规范计数培养基适用性检查的标准操作程序。范围：本标准适用于计数培养基适用性检查的操作程序。责任：质控部微生物检验人员负责执行，质控部负责人监督实施。正文：1概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是微生物限度检查结

2、果判断的重要影响因素。2培养基适用性检查的范围：2010年版《中国药典》规定微生物检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。3试验用菌株大肠埃希菌［CMCC(B)44102］金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］白色念珠菌［CMCC(F)98001］黑曲霉［CMCC(F)98003］4试验用培养基4.1菌液制备用培养基营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基4.2适用性检查培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基酵母浸出粉胨葡

3、萄糖琼脂培养基4.34.2中培养基的对照培养基5试验用稀释剂第5页共5页计数培养基适用性检查标准操作规程SOP-QC-10220.9%无菌氯化钠溶液含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液6试验用仪器设备6.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平6.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）6.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊

4、子、不锈钢药匙、白瓷盘。7操作步骤：7.1菌液的制备7.1.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h，取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。7.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h，取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0

5、.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。7.1.3接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。7.2菌液的计数（每种菌液制备2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽

6、孢杆菌的菌液1ml接种至营养琼脂培养基上，30～35℃培养48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接种至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养72h，计数。7.3适用性检查7.3.1培养基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。第5页共5页计数培养基适用性检查标准操作规程SOP-QC-10227.3.2营养琼脂培养基的适用性检查取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆

7、菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养48h，计数；被检培养基同法操作。7.3.3玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。7.3.4酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查取3个无菌平皿，分别接种

8、白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。7.4结果判断若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。8附件：计数培养基适用性检查记录/报告书（SOP-QC-10