欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:464112
大小:21.00 KB
页数:2页
时间:2017-08-05
《泥蚶亚铁螯合酶(ferrochelatase)基因的克隆和表达分析【开题报告】》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、毕业论文开题报告生物工程泥蚶亚铁螯合酶(ferrochelatase)基因的克隆和表达分析一、课题研究意义及国内外研究现状研究意义:亚铁螯合酶在血红蛋白中血红素的合成中起着重要的作用,是一种关键性酶。泥蚶的载氧蛋白为血红蛋白,这与其他大多数贝类载氧蛋白为血蓝蛋白不同。而造成这种差异现象,目前还没有人进行研究。因此,研究泥蚶亚铁螯合酶对于研究泥蚶血红蛋白功能与其“特殊性”有着重要的指导性意义。研究现状:红齿症,是一种常染色体隐性遗传缺陷病。携带者血红素及卟啉代谢紊乱,严重时会导致个体死亡。该病主要由于红血素生物合成途径最后一步中的亚铁螯合酶(Ferroch
2、elatase,FC)活性降低引起,该酶是红血素合成途径中的关键酶,催化二价亚铁嵌入原卟啉合成红色素,当FC活性不足时会造成血红素合成降低和卟啉及其前体过度增加,从而引起贫血、皮肤光过敏、骨质脆性和肝脏损伤等。目前,对人的FC基因研究较多,现已在人编码区和结合区发现90多个突变,但大多为无效等位基因。DiPierroEn等在研究人FC基因时发现FC基因启动子下游250bp位置发生(G—C)突变,从而影响特异性β1糖蛋白结合,造成酶活性显著降低,引起红细胞生成性原卟啉症(EPP)。Jenkins等在牛的FC基因上发现一个终止密码子突变为亮氨酸,该突变导致编
3、码蛋白增加了27个氨基酸,从而使酶活性降低,确定该突变为致病突变。泥蚶作为拥有血红蛋白的“特殊”一类贝类生物,研究泥蚶血红蛋白必然牵涉到亚铁螯合酶的研究,然而,其亚铁螯合酶基因相关研究未见报道,因此研究亚铁螯合酶基因的特征及相关功能,对研究血红蛋白有着重要的意义。二、课题研究的主要内容、预期目标和研究方案研究内容:克隆亚铁螯合酶基因全长;分析基因序列;进行亚铁螯合酶基因组织表达特异性分析预期目标:获得泥蚶亚铁螯合酶基因的cDNA全长克隆产物;分析序列特征;获得基因组织表达数据,分析基因表达特异性。研究方案:1.根据已有的EST序列,然后用3′,5′RAC
4、E的方法扩增基因亚铁螯合酶的cDNA全长;2.利用NCBIblast数据库、DNAman以及mega等相应生物分析软件,分析基因序列。3.利用荧光定量qRT-PCR法检验血液、肝胰腺、斧足、外套膜、闭壳肌、鳃等等组织中的表达规律;三、课题进度计划2010.8.30—2010.10.30:完成毕业论文选题,接受任务书,系统的查找相关的基因克隆和表达分析的资料和文献,制订实验的计划和方案2010.11.1—2011.1.20:申请实验教室、实验用品和相关试剂开始进行实验,记录关键性的实验步骤和实验数据;2011.1.21—2011.2.25:整理实验数据和完
5、成论文初稿。参考文献[1]彭礼琼,蒋明,郭志平等。青花菜查尔酮合成酶基因BoCHS的克隆,表达及序列分析。湖北农业科学杂志第49卷第8期[2]隋慧,杨金生。RHDVCD株VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析。中国动物检疫杂志第29卷第8期[3]FRIEDMAN,BAKER.Theevolutionofresistancegenesinmulti—proteinplantresistancesystems[J].CurrOpininGen,2007,17:493—499.[4]AGN0LA,BOURY,MONOT,eta1.Evidencethatal
6、eaf-disktestallowsassessmentofisolate-specificresistanceinBrassicaoleraceacropsagainstdownymildew(Peronosporaparasitica)[J].EurJPlantPathol,2003,109:471—478.[5]HOLTON,CORNISH.Geneticsandbiochemistryofanthocyaninbiosynthesis[J1.PlantCell,1995,7:1071—1083.[6]iPierro,Cappellini,Mazz
7、uechelli,eta1.ApointmutationaffectinganSPlbindingsiteinthepromoteroftheferrochelatasegeneimpairsgenetranscriptionandcauseserythropoieticprotoporphyria[J].ExpHematol,2005,33(5):584-91.[7]enkins,Robert,Ruth,eta1.Anovelstopmutation(X417L)oftheferrochelatasegeneinbovineprotoporphyria
8、,anaturalanimalmodelofthehumandisease[J]
此文档下载收益归作者所有